Certificat Nr.30-08 din 03/04/2008
FR.1.31.2008.01033

1. Obiecte de cercetare

Această procedură de măsurare se aplică cărnii afumate, peștelui afumat și produselor grase și stabilește determinarea concentrației în masă a benzo (a)pirenului prin cromatografie lichidă de înaltă performanță cu detecție fluorimetrică.

2. Domeniul de măsurare

MPC de benzo (a) piren în carne grasă, afumată, produse din pește afumat este de 1 μg / kg.

Metoda furnizează rezultatele măsurătorilor concentrației în masă a benzo (a) pirenului în intervalele prezentate în tabelul 1.

Tabelul 1. Domenii pentru măsurarea concentrației în masă a benzo (a) pirenului

Tip produs	Gama de masă concentrație, μg/kg	MPC, μg/kg
alimente grase	0,5 – 2,0	1,0
produse din carne afumată	0,5 – 2,0	1,0
produse din pește afumat	0,5 – 2,0	1,0

3. Pregătirea probei

Eșantionarea, conservarea și depozitarea probelor de produse se efectuează în conformitate cu GOST 7631, GOST 9792, TU și alte documente de reglementare care reglementează prelevarea de probe pentru anumite tipuri de produse.

Pregătirea probei constă în etapele de prelevare a probei (proba este prerăcită la o temperatură de minus 12-18 ° C timp de 30 de minute), măcinare, omogenizare cu sulfat de sodiu anhidru, extragerea unei probe omogenizate cu hexan într-un balon folosind un baie cu ultrasunete, precipitarea spontană a unui precipitat solid (în timp de 1-2 minute), degresarea extractului în congelator (se introduce o probă de silicagel în cilindru, se toarnă extractul, se pune conținutul cilindrului în congelator), stratul de hexan supernatant este purificat prin extracție în fază solidă fără reținere (pe cartușe Strata Silica Si-1) *, eluat de suflare într-un curent de aer sau gaz inert.

* Notă. Când concentrația de grăsimi a produsului analizat inițial este mai mică de 5%, o cantitate mică de reactiv eluant - acetat de etil (0,1 ml până la 6 ml de extract purificat) trebuie adăugată la extractul inițial al probei după congelare.

4. Efectuarea analizei cromatografice

4.1. Echipamente și condiții pentru analiza HPLC a soluțiilor de calibrare de benzo (a) piren, o probă de produs preparat.

Pentru analiza cromatografică a benzo (a)pirenului, este necesar să se utilizeze un sistem izocratic de cromatografie lichidă de înaltă performanță cu detecție fluorimetrică.

Pentru analiză, soluțiile de calibrare sunt pregătite preliminar din soluția GSO de benz (a) piren în hexan sau din soluția GSO de benz (a) piren în acetonitril (solventul este eliminat, proba standard este redizolvată în hexan); efectuați pregătirea probei; pregătiți dispozitivul pentru funcționare.

Echipament:

cromatograf lichid „Stayer” cu detector fluorometric;

computer personal cu software-ul instalat „MultiChrome pentru Windows XP” versiunea 1.5 sau 2x.

regim izocratic;

coloană: Luna C18 (2) 150x3,0 mm 3 μm (Phenomenex, SUA);

coloană de protecție: C18 4x3,0 mm (Phenomenex, SUA);

fază mobilă: acetonitril/soluție apoasă (75:25);

debit: 0,3 ml/min;

volumul buclei: 10 μl;

temperatura: 50 ° C;

Interval RFU: 0,01;

detecție: fluorometrică (λex: 365 ± 2 nm; λem: 400-460 nm).

Calibrarea se efectuează folosind soluții de calibrare (în toată gama de concentrații determinate) cel puțin o dată la două săptămâni, precum și la utilizarea unui nou lot de reactivi, înlocuirea coloanelor și după repararea cromatografului.

4.2. Determinarea conținutului cantitativ de benzo (a) piren din proba de produs.

Pentru a determina conținutul cantitativ al componentului probei de produs (benzo(a)piren), se efectuează analiza cromatografică a uneia dintre soluțiile de calibrare, urmată de analiza cromatografică a probei preparate. Pentru fiabilitatea măsurătorilor, analiza cromatografică atât a soluției de calibrare, cât și a probei preparate se efectuează de cel puțin 2 ori la rând.

Folosind software-ul instalat - „MultiChrome pentru Windows XP” în raport sau deasupra vârfului (în funcție de setările opțiunilor „VIEW”) la sfârșitul măsurării, rezultatul este determinat automat sub formă de concentrație în probă introduse în cromatograf (dar nu în proba inițială prelevată pentru cercetare!).

Pentru a obține un rezultat, este necesar să se efectueze cel puțin două măsurători paralele (obține două cromatograme). Media aritmetică a conținutului de benzo (a) piren din concentratul probei analizate C xp, μg/l (calculată din două valori ale concentrației masice de benzo (a) piren din concentratul probei analizate C 1 și C 2) este luat ca rezultat al măsurării.
Fracția de masă de benzo (a) piren din proba analizată (în proba originală) NS, μg / kg se calculează prin formula:

Unde:
C xp - valoarea medie a concentrației de benzo (a) piren, obținută în urma cromatografiei în două măsurători paralele [ng/ml];
V 1 - volumul extractului original, de fapt egal cu volumul de hexan luat pentru extracția primară (50 ml);
V 2 - volumul extractului (parte din original) luat pentru congelare (30 ml);
V 3 - volumul extractului (parte din extract după congelare) luat pentru SPE (6 ml) [ml];
V 5 - volumul extractului final, din care o parte se introduce în cromatograf (circa 3 ml) [ml];
K eșantionare - factorul de prelevare, ținând cont de fracția de masă a probei de produs (amestecat cu sulfat de sodiu) prelevată pentru extracție, din masa totală a probei prelevate pentru analiză. În toate cazurile este egal cu 0,736;
K îngheață Este factorul de pierdere al benzo (a) pirenului în timpul înghețului. Pentru toate categoriile de produse studiate, acest coeficient este același și egal cu 0,95;
K ext. 1 - coeficientul de extracție a lichidului primar cu hexan. Este aceeași pentru toate categoriile de produse studiate și este egală cu 0,95;
K TFExtr.2- coeficientul de extracție în fază solidă a benzo (a) pirenului este 0,95;
m pr. - sol sau sol luat pentru analiză [g].

Pagina 1

pagina 2

p. 3

pagina 4

p. 5

pagina 6

pagina 7

pagina 8

pagina 9

pagina 10

pagina 11

p. 12

p. 13

pagina 14

p. 15

pagina 16

p. 17

p. 18

p. 19

GOST 24104.

Evaporator rotativ IR-1M.

GOST 25336.

Apa de baie.

Agitator magnetic tip MM-ZM cu incalzire electrica.

Un iluminator ultraviolet de tip „Cromatoscop” cu un interval spectral de 250 - 700 nm și o lampă BUV-15 ca sursă de radiație UV.

Cameră cromatografică din sticlă 40 x 40 x 40 cm.

Plăci de sticlă pentru cromatografie în strat subțire 5 x 20 și 20 x 20 cm.

Coloană cromatografică din sticlă cu lungimea de 500 mm și diametrul de 20 mm cu un capăt trasat în partea inferioară și un rezervor cu o capacitate de 50 - 60 cm 3 PSh 14/23.

Frigider ХПТ-2-400-29 / 32 ХС sau ХШ-1-400-29 / 32 ХС conform GOST 25336.

De-a lungul tipului AIO-14 / 23-50 TS sau AIO-14 / 23-14 / 23-65 TS în conformitate cu GOST 25336.

Riglă de măsurare cu o gradare de 0,1 cm în conformitate cu GOST 427.

Deflegmator 250-19 / 26-29 / 32 ТС sau 300-19 / 26-29 / 32 conform GOST 25336.

Duză П-1-19 / 26-14 / 23-14 / 23 ТС sau Н-2-19 / 26-14 / 23 ТС conform GOST 25336.

GOST 25336.

GOST 25336. Cilindri de măsurare 1-100, 1-250 sau 3-100, 3-250 în conformitate cu GOST 25336.

Sticlă chimică V-1-100 sau V-1-150 în conformitate cu GOST 25336.

Baloane К-1-100-29 / 32 ТХС, К-1-25Р-29/32 ТХС, К-1-500-29 / 32 ТХС sau П-1-500-29 / 32 С253 ТХ6 în conformitate cu GOST.

Pâlnia Buchner 1 sau 2 sau 3 în conformitate cu GOST 9147.

Cupe de cântărire (sticle de cântărire) SV-14/8 sau SV-19/9 sau SV-24/10 sau SV-34/12 în conformitate cu GOST 25336.

Microseringi de tip MSh-10, capilare de sticlă.

Hârtie indicator universală.

Hârtie de filtru de laborator în conformitate cu GOST 12026.

Bisturiu sau spatulă subțire.

Alcool etilic rectificat conform GOST R 51652 sau alcool etilic rectificat tehnic conform GOST 18300.

Acetonitril conform documentului normativ.

Celuloza pulbere microcristalina conform documentului normativ.

GOST R 51650-2000

Benz (c) crisen, conținutul substanței principale nu este mai mic de 98%.

Sephadex LH-20.

Silicagel marca ASKG conform documentului normativ.

Se admite utilizarea altor instrumente de măsurare cu caracteristici metrologice și echipamente cu caracteristici tehnice, precum și a reactivi și materiale de calitate nu mai mică decât cele de mai sus.

5.2 Pregătirea testului

5.2.1 Prepararea solventului

Solvenții (n-hexan, alcool etilic, acetonă, benzen) sunt distilați în mod convențional cu un condensator de reflux.

Dimetilformamida se distilează prin adăugarea a 120 cm3 de benzen și 36 cm3 de apă la 1 dm3 de solvent într-un balon de distilare.

5.2.2 Prepararea celulozei acetilate

(50,0 ± 2,0) g de celuloză microcristalină se pun într-un balon cu fund plat cu o capacitate de 500 cm3, se prepară un amestec de 150 cm3 de benzen sau toluen, 70 cm3 de anhidridă acetică și 0,3 cm3 de acid sulfuric. într-un balon separat se adaugă. Amestecul de reacție se agită cu un agitator magnetic timp de 6 - 8 ore, se lasă fără agitare încă 18 ore, după care se decantează faza lichidă, iar reziduul se toarnă cu 300 cm 3 de alcool etilic, se agită, se lasă în alcool pt. 24 de ore, apoi celuloza se filtrează pe o pâlnie Buchner, se spală cu 100 cm 3 de alcool etilic și apă distilată până când apa de spălare este neutră (conform hârtiei indicatoare).

Apoi se verifică activitatea cromatografică a celulozei acetilate. Pentru aceasta, cu 3-4 ore înainte de analiză, se prepară un amestec de alcool etilic, acetonă și apă, luat într-un raport de volum de 60:25:15, și se toarnă într-o cameră cromatografică căptușită cu benzi de hârtie de filtru. Înălțimea stratului de solvent trebuie să fie de 1,5 - 2 cm.1,5 g de celuloză acetilată se suspendă în 7 cm 3 de alcool etilic și suspensia se toarnă într-un strat uniform pe o placă de sticlă de 5 x 20 cm, solventul se lasă să cadă. se evaporă complet în aer și se aplică pe placă cu o microseringă sau sticlă cu un capilar în punctul de 5 μl dintr-o soluție de benz (a) piren cu o concentrație de masă de 1 μg / cm 3. Placa este plasată în camera cromatografică și lăsată în cameră până când nivelul solventului crește cu cel puțin 100 mm de la linia de pornire. La sfârșitul cromatografiei, placa este îndepărtată, uscată în aer și o pată fluorescentă albastră de benzo (a) piren este observată sub o lampă de iradiere cu ultraviolete. Se măsoară distanța de la linia de pornire la frontul solventului și la mijlocul punctului benz (a) piren; calculați valoarea lui Rj, care estimează viteza de mișcare a benzo (a) pirenului de-a lungul plăcii, după formula:

unde X BP este distanța de la linia de plecare până la mijlocul benzului (a) punct piren, mm;

L este distanța de la linia de plecare la frontul solventului, mm.

Valoarea Rj a benzo (a) pirenului ar trebui să fie 0,1.

Pentru a pregăti o placă de lucru, 5 g de celuloză acetilată se suspendă în 20 cm 3 de alcool etilic și se toarnă într-un strat uniform pe o farfurie de 20x20 cm.

5.2.3 Prepararea soluțiilor standard de benzo (a) piren și benzo (c) crizenă

Se cântăresc (10,0 + 0,2) mg de benzo (a) piren și benzo (c) crisen în cupe de cântărire (sticle de cântărire). Porțiunile cântărite se transferă cantitativ în baloane cotate cu o capacitate de 100 cm 3: benz (a) piren-benzen, benz (c) crisen-acetonitril, apoi volumul soluției de benz (a) piren este adus la semn cu benzen. , volumul soluției este benz (c) crisen-acetonitril. Soluțiile rezultate au o concentrație de masă de 100 μg/cm3. Soluțiile se păstrează într-un loc răcoros și întunecat timp de cel mult trei luni.

5.2.4 Prepararea soluțiilor de lucru de benz (a) piren și benz (c) crisen

Soluțiile de lucru se prepară prin diluarea soluțiilor standard folosind pipete cu o capacitate de 1, 5 și 10 cm 3 și baloane cotate cu o capacitate de 100 cm 3, volumul soluției se aduce la semn cu solventul corespunzător, se agită și se depozitează. într-un loc rece și întunecat timp de cel mult o lună.

Prepararea unei soluții de benz (a) piren cu o concentrație de masă de 1,0 μg/cm 3 (pentru determinarea prin spectrofluorimetrie): 1,0 cm 3 se ia din soluția standard și se transferă într-un balon cotat cu o capacitate de 100 cm 3; volumul soluţiei este adus la semn cu benzen.

Prepararea unei soluții de benz (a) piren cu concentrație de masă 0,25: 1,0 și 5,0 μg/cm 3 (pentru determinarea prin cromatografie lichidă de înaltă performanță): 0,25 se ia din soluția standard; 1,0; 5,0 cm3, respectiv, și transferate în baloane cotate cu o capacitate de 100 cm3; volumul soluţiilor se aduce la semn cu acetonitril.

Prepararea soluțiilor de benz (c) crizenă cu concentrație de masă de 0,5 și 10 μg/cm 3: 0,5 și respectiv 10 cm 3 se iau din soluția standard și se transferă în baloane cotate cu o capacitate de 100 cm 3; volumul fiecărei soluții este adus la semn cu acetonitril.

5.2.5 Pregătirea soluțiilor de calibrare

Pentru a pregăti soluții de calibrare ale unui amestec de benz (a) piren și benz (c) crisen, volumele unei soluții standard de benz (a) piren cu o concentrație de masă de 100 μg / cm 3 și o soluție de lucru de benz (c). ) concentrația masică a crisenei de 10 μg/cm 3, se aduce volumul la semn cu acetonitril. Soluțiile rezultate sunt amestecate și depozitate într-un loc întunecat și rece timp de cel mult o lună.

masa 2

soluţie Volumul soluției inițiale, cm 3 Concentrația de masă în soluția de calibrare, μg / cm 3 Benz (a) concentrația masei de piren 100 μg / cm 3 Benz (c) concentrația de masă a crisenei 10 μg / cm 3 Benz (a) piren Benz (v) chrysena

5.3 Testare

5.3.1 Izolarea benzo (a) pirenului din produs

Într-un balon cu fund rotund sau un balon cu fund plat cu o capacitate de 100 cm 3 se pune o probă de produs cântărind 10 g, se adaugă o soluție formată din 4 g hidroxid de potasiu în 50 cm 3 de alcool etilic 92%. Conținutul balonului se amestecă prin agitare. Balonul este conectat la un condensator de reflux și încălzit într-o baie de apă sau pe un agitator magnetic în timp ce amestecul de reacție fierbe timp de 3 ore, apoi se adaugă în balon 100 cm 3 de apă distilată printr-un condensator. Masa de reacție este răcită la temperatura camerei. După răcire, masa de reacție este transferată într-o pâlnie de separare cu o capacitate de 500 cm3. Dacă, după hidroliză, în masa de reacție rămâne un reziduu solid, acesta se separă pe o pâlnie Buchner, spălând reziduul pe filtru cu 30 cm3 de alcool etilic fierbinte. Faza lichidă a masei de reacție este utilizată pentru extracție. Se adaugă 30 cm 3 N hexan într-o pâlnie de separare. Conținutul pâlniei este agitat și lăsat să se separe lichidele. Dacă se formează o emulsie, la amestec se adaugă 20 cm3 de alcool etilic într-o pâlnie de separare. După stratificare, faza apo-alcoolică inferioară este turnată într-un balon, iar extractul de hexan este turnat într-o altă pâlnie de separare. Acest tratament al masei de reacţie se efectuează încă de două ori, folosind 30 cm3 fiecare n hexan şi alcool etilic pentru a separa emulsia în porţii de 20 cm3.

La sfârșitul extracției, extractul combinat de hexan este spălat într-o pâlnie de separare cu apă distilată de trei ori câte 30 cm 3 fiecare, extractul este transferat într-un balon cu fund rotund cu o capacitate de 100 cm 3 , filtrăndu-se printr-un strat de sulfat de sodiu anhidru pe o pâlnie cu filtru poros. Soluția este evaporată pe un evaporator rotativ până la un volum de 50 cm 3 la o temperatură a băii de apă nu mai mare de 60 ° C.

Extractul îndepărtat este transferat într-o pâlnie de separare cu o capacitate de 500 cm3 și se adaugă la acesta 50 cm3 dintr-un amestec de dimetilformamidă și apă luată în raport de volum de 9:1. Amestecul se agită energic timp de 1 min, după separarea fazelor, cel inferior se toarnă într-un balon cu fund plat, cu o capacitate de 200 cm3, iar din stratul superior de hexan, se toarnă 50 cm3 dintr-un amestec de dimetilformamidă și apă. extras din nou. Stratul de hexan este îndepărtat, extractul de dimetilformamidă combinat într-un balon cu fund plat este transferat într-o pâlnie de separare, se adaugă 100 cm3 de apă distilată și se extrage din faza apoasă cu hexan de trei ori 50 cm3 fiecare. Faza apoasă se aruncă, iar extractul de hexan se spală cu apă de trei ori câte 30 cm 3 fiecare, se transferă într-un balon cu fund plat, se adaugă 10 g sulfat de sodiu anhidru și se menține timp de o oră, n hexanul se evaporă pe un aparat rotativ. evaporator la un volum de 1,5-2,0 cm3, solventul rămas este îndepărtat

GOST R 51650-2000

printr-un curent de aer printr-un tub de vid conectat la o pompă cu jet de apă, reziduul din balon se dizolvă în 0,5 cm 3 de alcool etilic.

Se cântărește (2,5 ± 0,2) g de Sephadex LH-20 într-un pahar cu o capacitate de 100 cm 3, se adaugă 20 cm 3 de alcool etilic și se lasă să se umfle 3 - 4 ore.coloana, se lasă solventul să se scurgă astfel încât stratul de alcool deasupra stratului sorbant rămâne cel puțin 2 mm. Restul extractului din balon este pipetat pe coloana pregătită, spălându-l din balon de trei ori cu alcool etilic în porții de 0,5 cm3. Eluția din coloana de hidrocarburi aromatice policiclice, inclusiv benz (a) piren, se realizează cu 40 cm 3 de alcool etilic, prima fracție cu un volum de 12 cm 3 se aruncă, a doua fracțiune cu un volum de 25 cm 3 este colectat. O viteză de eluare a solventului de 0,5 cm 3 / min este asigurată prin crearea unei ușoare suprapresiuni cu un curent de aer sau azot printr-o duză conectată la o suflantă sau un cilindru de gaz. Gazul trebuie furnizat printr-un tub de sticlă umplut cu silicagel.

Coloana Sephadex LH-20 este reutilizabilă. Pentru aceasta, fără a lăsa sorbentul să se usuce după fracţionare, coloana se spală cu 25 cm3 de alcool etilic şi se aplică următoarea probă.

Soluția celei de-a doua fracții este transferată într-un balon în formă de pară cu o capacitate de 50 cm3, solventul este evaporat la un volum de 0,5 - 1,0 cm3, restul acestuia este îndepărtat într-un curent de aer sau azot.

Fracția rezultată care conține benzo(a)piren este apoi analizată utilizând cromatografie lichidă de înaltă performanță sau spectrofluorimetrie.

În același timp, se efectuează un experiment de control, realizând toate etapele analizei folosind reactivi conform metodologiei, dar fără o probă de produs.

5.3.2 Determinarea conținutului de benzo (a) piren prin cromatografie lichidă de înaltă performanță

5.3.2.1 Condiții cromatografice

Condițiile de cromatografie sunt selectate în funcție de tipul de cromatograf lichid și de coloana cromatografică utilizată.

Ca exemplu, pot fi date următoarele condiții pentru determinarea cromatografică a benzo (a) pirenului.

Cromatograf lichid "АИех-334" cu detector fluorescent "Kratos FS-970".

Coloana Supelcosil LC-PAM cu granulatie 5 microni, lungime 150 mm, diametru - 4,6 mm.

Detector fluorometric: lungime de undă de excitație 300 nm, filtru de emisie 418 nm.

Faza mobilă: acetonitril și apă într-un raport de volum de 8: 2.

Viteza de eluare este de 2,0 cm3/min.

Volumul probei injectate este de 20 μl.

Sensibilitatea amplificatorului este selectată în așa fel încât intensitatea semnalelor de benzo (a) piren și standardul intern, benzo (c) crisen, să nu depășească 95% din scară.

Timp de analiză - 15 min; timpul de retenție al benz (a) piren - 5 min, benz (c) crisen - 13 min.

Soluțiile analizate sunt cromatografiate de două ori în aceleași condiții. Suprafețele de vârf sunt măsurate folosind un integrator sau manual ca produs dintre înălțimea vârfului și lățimea vârfului la jumătatea înălțimii.

Determinarea conținutului de benzo (a) piren se realizează prin metoda standardului intern sau prin metoda adițiilor.

5.3.2.2 Determinarea conținutului de benzo (a) piren în soluția (extractul) obținută conform 5.3.1 folosind metoda standardului intern

Atunci când se utilizează această metodă de evaluare cantitativă, cromatograful este pre-calibrat folosind soluțiile de calibrare preparate conform 5.2.5.

În condițiile specificate la 5.3.2.1, se înregistrează trei cromatograme pentru fiecare dintre soluțiile preparate și se măsoară suprafețele vârfurilor de benzo (a) piren și benzo (c) crisen. Determinați media aritmetică a ariei vârfurilor benzo (a) pirenului și benzo (c) crisenei, calculată din trei cromatograme.

Coeficientul de calibrare K este calculat prin formula

unde și și 2 sunt masele de benz (a) piren (/ l]) și benz (c) crisen (m 2) introduse în cromatograf, μg; 5) și ^ 2 sunt zonele vârfurilor benzo (a) piren (.9]) și benzo (c) crisen (A ^), cm 3.

Coeficientul de calibrare K este calculat pentru fiecare soluție.

Valorile sale nu trebuie să difere de media aritmetică a coeficientului de calibrare din toate rezultatele cu mai mult de 10%.

Cu o lungime de undă a luminii excitante de 300 nm și un filtru de emisie de 418 nm, valoarea factorului de calibrare este 9,5.

Înainte de începerea analizei în etapa de pregătire a probelor pentru hidroliză alcalină, la proba de produs și la proba martor se adaugă 50 μl dintr-o soluție de benzo (c)crisen cu o concentrație de masă de 0,5 μg/cm 3 . Ambele probe sunt trecute prin toate etapele de testare specificate la 5.3.1. Reziduul uscat se dizolvă în 200 μl de acetonitril.

În condițiile specificate la 5.3.2.1, se înregistrează cromatogramele unei soluții de benzo (a) piren cu o concentrație de masă de 100 μg / cm 3 și a unei soluții de benzo (c) crisen cu o concentrație de masă de 100 μg / cm 3 , notați timpul de eliberare a benzo (a) pirenului și benz (c) chrysena. Apoi, se înregistrează cromatogramele probei din experimentul de control cu ​​adăugarea de benzo (c) crisenă și o probă de produs cu aceeași adăugare de benzo (c) crisenă. Se măsoară zonele vârfurilor benzo (a) pirenului și benzo (c) crisenei pe cromatogramele probei de produs și ale probei de control.

Se înregistrează două cromatograme pentru fiecare probă. Media aritmetică a suprafețelor de vârf ale benzo (a) piren și benzo (c) crisen este calculată din două cromatograme.

Pe baza datelor obținute, se determină masa de benzo (a) piren, μg, în proba de produs m \ și proba din experimentul de control m 2.

„72 - masa de benzo (a) piren din proba martor, μg; t st este masa de benzo (c) crisen introdusă în proba de produs și proba martor, μg;

S "] și S 2 - zonele vârfurilor de benzo (a) piren pe cromatogramele probei de produs (.S"]) și ale probei martor (.S /), cm 2;

L /, L / - zonele vârfurilor de benzo (s) crisenă de pe cromatogramele probei de produs (.SS) și ale probei din experimentul martor (L /), cm 2;

K este coeficientul de calibrare stabilit prin 5.3.2.2.

5.3.2.3 Determinarea conținutului de benzo (a) piren în soluția (extractul) obținută conform 5.3.1 prin metoda adițiilor

Pentru evaluarea cantitativă la utilizarea metodei de adăugare, o probă din experimentul martor este analizată simultan cu proba de produs. Fracțiile izolate din probele de produs și din experimentul de control conform 5.3.1 se dizolvă în 400 μl de acetonitril. Soluțiile rezultate sunt împărțite în două părți, luând o parte mai mică (40 μl) într-o eprubetă sau un balon în formă de pară.

Înregistrați cromatogramele probei de produs, ale probei de control și cromatograma unei soluții de benz (a) piren cu o concentrație de masă de 0,25 μg/cm3. Se notează momentul eliberării benzo (a) pirenului.

În părțile rămase ale probei de produs și ale experimentului de control (360 μl), se adaugă 10 - 20 μl de soluție de benz (a) piren cu o concentrație de masă de 5 μg / cm 3. Soluțiile rezultate sunt reintroduse în cromatograf.

Toate cromatogramele sunt înregistrate de două ori. Măsurați zonele vârfurilor benzo (a) pirenului. Media aritmetică a zonei vârfului benzo (a) pirenului este calculată din cele două cromatograme.

Pe baza datelor obținute, se determină masa de benzo (a) piren, μg, în proba de produs / 77] și în proba experimentului martor t 2:

t op ■ S 1. _ t la ■ S 3 (9)

S 2 - 0,95) '2 5 4 - 0,95 3'

unde / 77 op și / 77 k este masa de benzo (a) piren adăugată la partea de extract din proba de produs (t op) și proba de control (/%), μg;

S "] și S 2 - zonele vârfurilor de benzo (a) piren de pe cromatogramele probei de produs (.S"]) și proba de produs cu adaos de benzo (a) piren (L /), cm 2;

L / i S) - zone de vârfuri de benzo (a) piren pe cromatogramele probei de control (L /) și proba din experimentul de control cu ​​adaos de benz (a) piren (L /), cm 2;

0,9 este proporția de probă la care se adaugă benzo (a) piren.

5.3.3 Determinarea conținutului de benzo (a) piren prin spectrofluorimetrie la temperatura camerei

La determinarea conținutului de benzo (a) piren prin spectrofluorimetrie, concomitent cu proba de produs, se analizează o probă martor, la care 50 μl dintr-o soluție de benzo (a) piren cu o concentrație de masă de 1 μg/cm 3 e adăugat.

Fracțiile obținute conform 5.3.1, care conțin benzo (a) piren, dintr-o probă de produs și o probă din experimentul martor cu adaos, sunt dizolvate în 0,5 cm 3 de benzen și apoi supuse unei purificări suplimentare într-un strat subțire. strat de celuloză acetilată.

Pentru aceasta, o placă de 20 x 20 cm, pregătită conform indicațiilor de la 5.2.2, este împărțită în două câmpuri: lateral - 1,5 - 2 cm lățime și cel principal, trecând o bandă despărțitoare peste stratul absorbant cu un bisturiu sau un subțire. spatula. Pe câmpul principal în bandă continuă, la 2 cm de marginea inferioară a plăcii și la 1 cm de marginile laterale, se aplică o soluție a fracției izolate la 5.3.1. Soluția se aplică folosind un capilar sau microseringă trasă subțire, dimensiunea petelor nu trebuie să depășească 5 mm. Pentru transferul cantitativ al substanței, se spală de două ori de pe pereții balonului cu o cantitate mică de benzen (0,4 - 0,6 cm 3). Pe linia de pornire a câmpului lateral se aplică în punct 5 μl dintr-o soluție de benzo (a) piren cu o concentrație de masă de 1 μg/cm 3 . După evaporarea completă a solventului, placa este plasată într-o cameră cromatografică preasaturată la un unghi de 70 ° - 85 ° și se eluează într-un amestec de alcool etilic, acetonă și apă luat într-un raport de 60:25. :15. Când partea frontală a solventului ajunge la 2 cm de marginea superioară a plăcii, acesta este scos din cameră, uscat în aer, iar zona cromatografică a benzo (a) pirenului este dezvoltată sub o lampă de iradiere cu ultraviolete. Adsorbantul din zona benz (a) pirenică din câmpul principal este răzuit de pe placă cu un bisturiu sau o spatulă subțire și transferat într-un filtru de sticlă, din care substanța este eluată în mai multe etape 50 cm 3 de benzen în baloane cu un capacitate de 100 cm3, apoi solventul este evaporat la un volum mic, restul de solvent este îndepărtat cu un curent de aer și se adaugă 1 cm3 de benzen în balon.

Spectrele de fluorescență ale probei de produs și proba de control cu ​​adăugarea de benzo (a) piren sunt înregistrate pe un spectrofluorimetru la o lungime de undă a luminii excitante de 386 nm în intervalul 400 - 440 nm la o viteză de scanare de 60 nm / min.

Spectrele soluțiilor sunt înregistrate într-un singur mod de amplificare, ajustând fanta și câștigul în soluția probei de control, astfel încât semnalul benzo (a) pirenului la 406 nm să fie 0,4 - 0,6 din scara instrumentului. Pentru fiecare soluție, spectrul este înregistrat de două ori pentru a obține o reproductibilitate bună. Pe spectrogramele obținute la maxim la 406 nm, înălțimea liniei spectrale a benzo (a)pirenului este măsurată în milimetri pentru o probă de produs și o probă din experimentul martor. Calculați valoarea medie a înălțimii benzo (a) pirenelor din datele a două spectrograme. La niveluri ridicate de benzo (a) piren din produs, probele sunt diluate cu benzen și spectrul este reînregistrat în același mod de amplificare ca și pentru proba de control.

Se fac două determinări paralele.

5.4 Exprimarea rezultatelor

5.4.1 Fracția de masă a benzo (a) pirenului din produsul X \,% sau X 2, mg / kg, atunci când se utilizează metoda cromatografiei lichide de înaltă performanță, se calculează prin formulele:

(t 1 - t 2) ■ 100 (t g - t 2) t ■ 1000 1000 „t 10

unde mi este masa benzo (a) pirenului din proba de produs, μg;

m2 — masa de benzo (a) piren din proba martor, μg; t este masa produsului luat pentru analiză, g.

5.4.2 Fracția de masă a benzo (a) pirenului din produsul A),% sau X 2, mg/kg, atunci când se utilizează metoda spectrofluorimetriei, se calculează prin formulele:

S st NU-100 s ST // V t ■ 1000 ■ 1000 ■

unde c st este concentrația de masă a benzo (a) pirenului din soluția de lucru preparată conform 5.2.4 și adăugată la proba de control, μg/cm 3;

înălțimea liniei spectrale de benzo (a) piren pe spectrograma probei de produs, mm; înălțimea liniei spectrale de benzo (a) piren pe spectrograma probei martor, mm;

V este volumul soluției de lucru de benzo (a) piren adăugat la proba martor, cm 3; t este masa probei de produs prelevată pentru testare, g.

Media aritmetică a două determinări paralele cu același număr de cifre semnificative este luată ca rezultat final al testului.

Dacă discrepanța dintre rezultatele determinărilor paralele nu depășește \ X-y - YG 2 |<

< 0,01 dX, где, Х 2 и X- результаты параллельных определений и их среднее арифметическое, а d - норматив контроля сходимости, то среднее арифметическое X принимают за результат анализа. В противном случае анализ повторяют. Значение норматива d приведено в таблице 3.

Pe baza rezultatului X al analizei obţinute şi a valorii erorii relative q din tabelul 3, se calculează eroarea absolută A = 0, (ШХ

Rezultatul analizei este prezentat ca (X ± A), mg/kg sau% la P = 0,95.

5.5 Controlul acurateței rezultatelor analizei

5.5.1 Repetabilitatea determinărilor paralele este controlată pentru fiecare probă analizată în conformitate cu 5.3.

5.5.2 Utilizați mostre de lucru pentru a controla reproductibilitatea. Proba este împărțită în două părți egale și analizată conform metodologiei în laboratoare diferite sau într-un singur laborator, variind pe cât posibil condițiile de analiză, adică se folosesc diferite seturi de sticlă volumetrică, analizele se efectuează pe diferite zile sau de către doi analiști diferiți.

Reproductibilitatea analizelor de control este considerată satisfăcătoare dacă \ X-y - X 2 \<

< 0,01 DX, где Л), Х 2 и X- результаты анализа одной и той же пробы, полученные в разных лабораториях или при варьирующих условиях в одной лаборатории и их среднее арифметическое значение, D - значение норматива внутреннего оперативного контроля воспроизводимости. Значение норматива D приведено в таблице 3.

Frecvența controlului reproductibilității - cel puțin o dată la două săptămâni

Tabelul 3 - Gama de măsurători, valoarea caracteristicii erorii relative și standardele de control operațional al componentei aleatorii a erorii relative (convergență și reproductibilitate) la un nivel de încredere de P = 0,95

5.5.3 Pentru a controla precizia, utilizați mostre de lucru cu un adaos cunoscut de benzo (a) piren. Proba este împărțită în două părți egale, dintre care prima este analizată în conformitate cu procedura, iar în a doua, este introdus un aditiv cunoscut de benzo (a) piren și apoi analizat, de asemenea, în conformitate cu procedura. Cantitatea de aditiv ar trebui să fie de 50 - 150% din conținutul de benzopiren din proba analizată.

Precizia analizelor de control este considerată satisfăcătoare dacă | A) - X- c \< К, где Л), X и с - результаты контрольных анализов пробы с добавкой бенз(а)пирена, реальной пробы и величина добавки бенз(а)пирена соответственно; К - норматив оперативного контроля точности.

Tastat în FGUP „STANDARTINFORM” pe un computer.

Tipărit la filiala Întreprinderii Unitare de Stat Federal „STANDARTINFORM” - tip. „Imprimanta Moscova”, 105062 Moscova, Lyalin per., 6

GOST R 51650-2000

1 domeniu de utilizare.................................................. ......... 1

3 Eșantionarea ............................................... . ............... 2

4 Metoda spectrofluorimetriei la temperatură joasă ................................ 2

4.1 Aparatură, materiale și reactivi .......................................................... 2

4.2 Pregătirea pentru testare ................................................. ... 3

4.3 Efectuarea testului ................................................ .. .... 3

4.4 Prelucrarea rezultatelor ................................................. ..... 6

4.5 Controlul acurateții rezultatelor analizei ................................................ 6

5 Metode de cromatografie lichidă de înaltă performanță și spectrofluorimetrie la

temperatura camerei ................................................ ...... 7

5.1 Aparatură, materiale și reactivi .......................................................... 8

5.2 Pregătirea pentru testare ................................................. ... nouă

5.3 Testare ................................................ . ...zece

5.4 Prelucrarea rezultatelor ................................................. .....13

5.5 Controlul acurateții rezultatelor analizei ................................................ 14

6 Cerințe de siguranță ................................................. 15

7 Cerințe de calificare a operatorului ................................................ 15

Anexa A Bibliografie

STANDARDUL DE STAT AL FEDERATIEI RUSA

PRODUSE ALIMENTARE Metode pentru determinarea fracției de masă a benzo (a) pirenului

Metode de determinare a fracțiunii benz (a) piren din masa totală

Data introducerii 2001-07-01

1 domeniu de utilizare

Acest standard se aplică materiilor prime alimentare, produselor alimentare, aditivilor alimentari și de aromă și specifică metode pentru determinarea fracției de masă a benzo (a) pirenului utilizând spectrofluorimetrie la temperatura joasă și a camerei și cromatografie lichidă de înaltă performanță.

Cântare de laborator de uz general din clasa a 2-a de precizie cu limita maximă de cântărire de 500 g în conformitate cu GOST 24104.

Evaporator rotativ IR-1M.

Apa de baie.

Sobă electrică de uz casnic cu spirală închisă și regulator de încălzire în conformitate cu GOST 14919.

Vas Dewar pentru azot lichid de orice capacitate

Băi pentru cromatografie (cuve foto emailate).

Farfurii din sticla cu dimensiunile 15 x 30 si 20 x 40 cm.

Baloane К-1-250-29 / 32 ТХС, К-1-100-29 / 32 ТХС, К-1-500-29 / 32 ТХС sau P-1-500-29 / 32 ТХС2 în conformitate cu GOST.

Frigidere HIT-1-300-14 / 23 XC sau HIT-1-400-14 / 23 XC în conformitate cu GOST 25336.

Frigidere KhPT-2-400-29 / 32 XC și KhPT-1-300-29 / 32 sau KhPT-400-29 / 32 XC în conformitate cu GOST 25336.

Condensator de reflux 250-19 / 26-29 / 32 ТС sau condensator de reflux 300-19 / 26-29 / 32 ТС în conformitate cu GOST 25336.

Eprubete de sticlă P2-10-180 XC în conformitate cu GOST 25336.

Duza P-1-19 / 26-14 / 23 ТС sau Н2-19 / 23 în conformitate cu GOST 25336.

Pompă cu jet de apă de laborator în conformitate cu GOST 25336.

Pipete cu o capacitate de 1, 2, 5, 10 cm 3 în conformitate cu GOST 29228 și GOST 29229.

Pâlnie VFO-32-POR 100-14 / 23 XC sau VFO-32-POR 160-14 / 23 XC în conformitate cu GOST 25336.

Tuburi măsurate P-2-15-14 / 23 XC în conformitate cu GOST 1770.

Pâlnie de separare VD-1-500 sau VD-3-500 în conformitate cu GOST 25336.

Cilindri de măsurare 1-100, 1-250 sau 3-100, 3-250 în conformitate cu GOST 25336.

Cupe de cântărire (sticle de cântărire) SV-14/8, sau SV-19/9, sau SV-24/10 sau SV-34/12 în conformitate cu GOST 25336.

Un termometru cu un interval de măsurare a temperaturii de 0-250 ° C cu o gradare de 1 ° C în conformitate cu GOST 29224.

Capilare de sticlă, baghete de sticlă.

n octan, h., conform documentului normativ.

n.hexan, h., conform documentului normativ.

Alcool etilic tehnic rectificat conform GOST 18300 sau alcool etilic rectificat conform GOST R 51652.

Fracția de eter de petrol 40 - 70 ° С conform documentului normativ.

Oxid de aluminiu pentru cromatografie de gradul II de activitate conform documentului normativ.

Benz (a) piren, conținutul de substanță de bază nu este mai mic de 98%.

1,12-Benzperilen, conținutul de substanță de bază nu este mai mic de 98%.

Este permisă utilizarea altor instrumente de măsură cu caracteristici metrologice și echipamente cu caracteristici tehnice, precum și a reactivi și materiale de calitate nu mai mică decât cele indicate.

4.2 Pregătirea testului

4.2.1 Curăţarea solvenţilor

Solvenții (n-octan, alcool etilic, eter de petrol, cloroform și n-hexan) sunt distilați într-o manieră convențională cu un condensator de reflux.

4.2.2 Prepararea aluminei

Alumina este uscată într-un cuptor la o temperatură de (250 + 4) ° C timp de 4 ore și depozitată într-un vas cu dop măcinat.

4.2.3 Prepararea soluției de benzo (a) piren pentru cromatografie în strat subțire (soluție martor).

Într-o sticlă de cântărire se cântăresc aproximativ 10 mg de benzo (a) piren, se adaugă câțiva mililitri de eter de petrol până când proba este complet dizolvată.

Soluția rezultată este transferată cantitativ într-un balon cotat cu o capacitate de 100 cm 3 și volumul soluției este adus la semn cu eter de petrol. Perioada de valabilitate a soluției nu este mai mare de trei luni în frigider.

4.2.4 Prepararea soluției standard de benzo (a) piren

Se cântăresc (10,0 ± 0,2) mg de benzo (a) piren într-o sticlă de cântărire, se adaugă câțiva mililitri de n-octan până când proba este complet dizolvată. Soluția rezultată se transferă cantitativ într-un balon cotat cu dop măcinat cu o capacitate de 100 cm 3 și se aduce la semn cu n-octan. Concentrația de masă a benz (a) piren în soluția rezultată este de 100 μg / cm 3. Păstrați soluția la frigider. Perioada de valabilitate a soluției nu este mai mare de trei luni.

4.2.5 Prepararea soluțiilor de lucru de benz (a) piren

Soluții de lucru de benz (a) piren cu concentrație de masă 0,1; Se prepară 0,04 și 0,02 μg/cm 3 în n-octan prin diluarea succesivă a soluției standard inițiale de benzo (a) piren preparată conform punctului 4.2.4 în baloane cotate cu dop măcinat cu o capacitate de 100 cm 3. Soluțiile se păstrează la frigider. Perioada de valabilitate a soluțiilor nu este mai mare de o lună.

4.2.6 Prepararea soluției standard de 1,12-benzperilen (standard intern)

Pentru a prepara soluția inițială, se cântăresc (10,0 + 0,2) mg de 1,12-benzperilen într-o sticlă de cântărire, se adaugă câțiva mililitri de n-octan până când proba este complet dizolvată. Soluția rezultată se transferă cantitativ într-un balon cotat cu dop măcinat cu o capacitate de 100 cm 3 și se aduce la semn cu n-octan. Concentrația de masă a 1,12-benzperilen în soluția rezultată este de 100 μg / cm 3. Păstrați soluția la frigider. Perioada de valabilitate a soluției nu este mai mare de trei luni.

4.2.7 Prepararea soluțiilor de lucru de 1,12-benzperilen (soluții standard interne)

Soluții de lucru de 1,12-benzperilen cu concentrație de masă 0,01; 0,005; 0,002 și 0,001 μg/cm3

preparat în n-octan prin diluarea succesivă a soluției standard stoc preparată conform 4.2.6 în baloane cotate cu dop măcinat cu o capacitate de 100 cm 3. Soluțiile se păstrează la frigider. Perioada de valabilitate a soluțiilor nu este mai mare de o lună.

4.3 Efectuarea testului

4.3.1 Izolarea benzo (a) pirenului din produs

Într-un balon cu fund rotund cu o capacitate de 500 cm 3 se pune o probă de produs cântărind 25 g, se adaugă în balon 20 cm 3 apă distilată, 200 cm 3 alcool etilic și 20 g hidroxid de potasiu.

Conținutul balonului se amestecă prin agitare. Balonul este conectat la un condensator de reflux și încălzit într-o baie de apă în timp ce amestecul de reacție fierbe timp de 3 ore, apoi se adaugă în balon 150 cm 3 de apă printr-un condensator; balonul se scoate din baie si se raceste la temperatura camerei.

După răcire, faza lichidă a amestecului de reacție este transferată prin decantare într-o pâlnie de separare, lăsând restul de produs în balon. Se adaugă 150 cm3 de n hexan în balonul cu reziduul, conținutul balonului este agitat energic și n hexanul este decantat într-o pâlnie de separare.

Pâlnia se astupă și se agită energic, apoi se fixează într-un trepied și se lasă să se separe lichidele. Pentru a separa emulsia rezultată, la amestec se adaugă 20 cm3 de alcool etilic într-o pâlnie de separare. După delaminare, faza apo-alcoolică inferioară se toarnă înapoi în balonul cu sedimentul, iar extractul de hexan este turnat într-un balon cu o capacitate de 500 cm3.

Acest tratament al amestecului de reacție este efectuat de încă două ori, folosind 100 cm3 n-hexan pentru extracție și alcool etilic pentru a delamina emulsia în porțiuni de 20 cm3.

La sfârșitul extracției, reziduul din balon și hidrolizatul se aruncă, iar extractul se spală într-o pâlnie de separare cu apă distilată de trei ori câte 50 cm 3 fiecare și se evaporă în porții într-un balon cu fund rotund cântărit în prealabil până la a doua zecimală cu o capacitate de 250 cm 3 pe un evaporator rotativ la o temperatură a băii de apă nu mai mare de 60 ° C. Balonul cu extractul este lăsat într-o hotă pentru a îndepărta urmele de solvent și apoi se cântărește din nou. Diferența dintre cântăriri este utilizată pentru a determina masa extractului izolat.

Din extractul din balon, se ia 1/5 parte într-o sticlă de cântărire fără a cântări. Se cântărește balonul cu restul de extract. Se adaugă 0,1-0,2 cm 3 din soluția de benzo (a) piren „martor” preparată conform 4.2.3 în sticla cu o parte din extract. Conținutul sticlei și restul balonului sunt dizolvate într-un volum mic de eter de petrol.

Pentru separarea cromatografică a extractului, alumina este turnată uniform pe o placă de sticlă de 20x40 cm. Apoi, folosind o baghetă de sticlă, împărțită în trei părți (14, 1 și 3 cm) cu inele de cauciuc de 1 mm grosime și 3 mm lățime, alumina se nivelează cu grijă.

Soluțiile rezultate se aplică cantitativ pe placa pregătită cu capilare de sticlă: pe partea îngustă - soluția din sticlă ("martor"), pe partea largă - extractul de produs din balon. Soluțiile se aplică uniform într-o bandă continuă, plecând de la marginea inferioară a plăcii 7 - 8 cm.

Placa este plasată într-o baie cromatografică la un unghi ușor de 20 ° - 25 °, se toarnă eter de petrol astfel încât să nu ajungă la linia de probă. Baia este acoperită cu sticlă și se efectuează cromatografia, aducând partea din față a solventului la marginea superioară a plăcii.

Fără a usca placa, iradiați-o cu lumină ultravioletă și determinați locația benzo (a) pirenului în proba de testat prin banda luminoasă a „martorului”. Marcați limitele benzului benz (a) piren pe cromatograma probei de testat. Placa este uscată la aer într-o hotă.

Banda de oxid de aluminiu marcată pe cromatograma probei de testat este îndepărtată de pe placă cu ajutorul unei lame de sticlă și transferată cantitativ pe placa poroasă a pâlniei de filtrare. Pâlnia este conectată la un balon cu fund rotund cu o capacitate de 100 cm 3 și benzo (a) pirenul este eluat din oxid de aluminiu cu 50 cm 3 de benzen, adăugând benzen în porții mici și amestecând alumina pe pâlnie cu un bețișor. . Benzenul este evaporat până la uscare pe un evaporator rotativ la o temperatură a băii de apă de cel mult 60 ° C. Restul din balon este transferat cantitativ cu octan într-o eprubetă. Volumul soluției din eprubetă nu trebuie să depășească 5 cm 3.

În analiza unor produse, nu există o separare completă și clară a componentelor fluorescente ale probei în timpul cromatografiei primare a extractului izolat din produs. În acest caz, o bandă mai largă de alumină este izolată pe placă la nivelul „martorului”; benz (a) pirenul este eluat din alumină cu benzen, așa cum este descris mai sus, iar reziduul de evaporare este dizolvat în alcool etilic și extractul de alcool rezultat este recromatografiat.

Pentru separarea cromatografică a extractului alcoolic se folosește o placă de 15 x 30 cm cu o grosime a stratului de oxid de aluminiu de 0,3 mm. Pe placă sunt separate două benzi de 10 și 3 cm lățime, pe partea largă a plăcii se aplică un extract alcoolic din produsul analizat cu ajutorul unui capilar de sticlă și o soluție de benz (a) piren în eter de petrol („martor ” soluție) se aplică pe partea îngustă.Placa se pune în baie la un unghi de 20 - 25 ° și se efectuează cromatografia în cloroform, aducând partea din față a solventului la marginea superioară a plăcii. În lumină ultravioletă, se observă o bandă „martor” de alumină cu benzo (a) piren al produsului de testat. Apoi benz (a) pirenul este eluat din alumină cu benzen și toate operațiunile ulterioare sunt efectuate așa cum este descris mai sus.

GOST R 51650-2000

O soluție de benzo (a) piren în n-octan este transferată într-o eprubetă. Volumul soluției nu trebuie să depășească 5 cm 3 cu o probă inițială de produs de 25 g.

În soluția (extractul) rezultată, conținutul de benzo(a)piren se determină prin spectrofluorimetrie la temperatură joasă, folosind metoda adiției sau metoda standard intern pentru evaluarea cantitativă.

4.3.2 Determinarea conținutului de benzo (a) piren în soluția (extractul) obținut la 4.3.1 prin metoda adițiilor.

Se toarnă 1 cm 3 din soluția rezultată de benzo (a) piren în n-octan în trei eprubete cu o pipetă. Apoi, în prima eprubetă se toarnă 2 cm 3 de N. octan. În a doua eprubetă se toarnă 1,5 cm 3 de N. octan și 0,5 cm 3 dintr-o soluție de lucru de benzo (a) piren cu o concentrație de masă de 0,1 μg/cm 3, preparată conform 4.2.5. În a treia eprubetă se adaugă 1 cm 3 de N octan și 1 cm 3 din aceeași soluție de lucru de benzo (a) piren ca în a doua eprubetă.

Analiza spectrofluorometrică începe cu al treilea tub. Pentru aceasta, a treia eprubetă este plasată într-un balon Dewar cu azot lichid în fața fantei de intrare a spectrofotometrului; setați linia analitică a fluorescenței benzo (a) pirenului la 403 nm la o lungime de undă a luminii excitante de 367 nm. Prin reglarea câștigului și deschiderea fantei, precum și prin reglarea simultană a eprubetei din balonul Dewar, semnalul maxim este atins de dispozitivul de înregistrare al spectrofotometrului (până la 50 - 80%), după care spectrograma benzo. (a) pirenul este înregistrat în regiunea de 401 - 404 nm, fixând valoarea spectrofotometrului dispozitivului de înregistrare la o lungime de undă de 401 nm. Înregistrarea spectrului se repetă de două ori.

Apoi, cel de-al doilea și primul tub sunt înghețați secvențial în azot lichid și spectrele de fluorescență sunt înregistrate în intervalul de lungimi de undă de 401 - 404 nm; asigurați-vă că setați stiloul înregistratorului la o lungime de undă de 401 nm în aceeași poziție ca și atunci când scanați. proba din al treilea tub.

Concentrația de masă a benzo (a) pirenului din extractul analizat se determină conform graficului, pe care este reprezentată valoarea adăugării benzo (a) pirenului (μg) de-a lungul axei absciselor și înălțimea maximului caracteristicii linia de benzo (a) piren la 403 nm este trasată de-a lungul axei ordonatelor, măsurată din spectrogramele obținute în milimetri.

Dacă concentrația de masă a benzo (a) pirenului din soluția de testat se încadrează în intervalul adecvat pentru măsurători, atunci punctele experimentale obținute se află pe o singură linie dreaptă. Extrapolarea acestei drepte la intersecția cu axa absciselor dă pe ea un segment corespunzător conținutului de benzo (a) piren din soluția fără aditiv, adică în 1 cm 3 din soluția de testat. Dacă concentrația de masă a benz (a) pirenului din soluția analizată este mai mare decât limita superioară a intervalului de concentrații măsurate de dispozitiv, atunci soluția analizată este diluată cu n-octan.

4.3.3 Determinarea conținutului de benzo (a) piren în soluție (extract) obținut conform 4.3.1 prin metoda standard internă

1,12-benzperilen a fost utilizat ca standard intern. Într-o eprubetă se toarnă 3 cm 3 dintr-o soluție de benzo (a) piren în n-octan obținută conform 4.3.1 și se introduc într-un balon Dewar cu azot lichid în fața fantei de intrare a spectrofotometrului, linia analitică. este setat la 403 nm la o lungime de undă a luminii excitante de 367 nm și se efectuează înregistrarea spectrului soluției în intervalul de lungimi de undă de 401 - 409 nm. În funcție de intensitatea liniei (în funcție de înălțimea vârfului maximului liniei caracteristice de benzo (a) piren la 403 nm), se estimează conținutul aproximativ de benzo (a) piren din probă. În conformitate cu această estimare, o soluție de 1,12-benzperilen într-o astfel de cantitate este adăugată într-o eprubetă cu 3 cm 3 dintr-o soluție de benz (a) piren în n-octan într-o astfel de cantitate încât intensitatea de 1 ,12-benzperilen în spectrul probei la

406,3 nm a fost de 3 - 5 ori intensitatea liniei de benzo (a) piren la o lungime de undă de 403 nm.

Spectrul este înregistrat în intervalul de lungimi de undă 401-409 nm de două ori.

Intensitățile liniilor caracteristice de benzo (a) piren la 403 nm și 1,12-benzperilen la

406,3 nm (H | și respectiv H 2) se determină din spectrograme, măsurând înălțimile vârfurilor în maximele liniilor caracteristice ale acestor compuși în milimetri. În calcule se ia valoarea medie. Calculați coeficientul de raport (K) al intensității liniei de benz (a) piren (EHD la intensitatea liniei de 1,12-benzperilen (EG 2), K = //] /// 2.

În plus, acest coeficient este determinat pentru soluții standard de benzo (a) piren (X st). Pentru aceasta, în două eprubete se toarnă 3 cm 3 de soluții standard de benzo (a) piren cu o concentrație de masă de 0,02 și 0,04 μg / cm 3. În fiecare eprubetă se toarnă aceeași cantitate de 1,12-benzperilen ca și în eprubeta cu proba. Spectrele fiecărei soluții sunt înregistrate de două ori în intervalul de lungimi de undă de 401 - 409 nm.

În acest caz, este imperativ ca poziția stiloului înregistratorului la o lungime de undă de 401 nm să fie fixată la același nivel în toate cazurile.

Apoi, spectrogramele determină intensitatea liniilor caracteristice ale benzo (a) pirenului la 403 nm și 1,12-benzperilen la 406,3 nm (H și respectiv H2). În calcule se ia valoarea medie. Calculați K st = H ^ H 2 pentru fiecare concentrație de benzo (a) piren.

Concentrația de masă a benz (a) piren în soluția analizată c, μg / cm 3, se calculează prin formula:

s s st * K / K st, (1)

unde c st este concentrația de benzo (a) piren într-o soluție standard, μg / cm 3;

K este coeficientul găsit din spectrograma soluției analizate cu adăugarea de 1,12-benzperilen;

K C1 este coeficientul găsit din spectrogramele unei soluții standard de benzo (a) piren cu adăugarea de 1,12-benzperilen, a cărei valoare este mai apropiată ca valoare de coeficientul soluției analizate cu adăugarea corespunzătoare a 1 ,12-benzperilen.

Se efectuează două determinări paralele și în același timp un experiment de control, care se realizează prin toate etapele analizei folosind toți reactivii conform metodologiei, dar fără o probă de produs.

4.4 Exprimarea rezultatelor

Fracția de masă a benzo (a) piren L),%, X și X 2, mg / kg, se calculează prin formulele:

= (s - ep) ■ m l V ■ 100 = (s - ep) ■ t 1 ■ V (2)

3 t 2 ■ t ■ 1000 ■ 1000 t 2 ■ t '

_ (s - s 0) ■ V ■ t 1 (3)

unde c este concentrația de benzo (a) piren, stabilită conform 4.3.2 sau 4.3.3 în soluția (extractul) din produsul analizat obținut conform 4.3.1, μg/cm 3; с 0 - concentrația de benzo (a) piren în soluția experimentului martor obținut la 4.3.1, μg/cm 3; V este volumul soluției de benzo (a) piren izolat din proba de produs analizat, cm 3;

/ „I este masa extractului izolat din produsul analizat, g; t 2 este masa extractului aplicat pe o bandă largă a plăcii, g; t este masa probei de produs, g.

Rezultatul este rotunjit la a doua cifră semnificativă.

Media aritmetică a două determinări paralele cu același număr de cifre semnificative este luată ca rezultat final al determinării.

Dacă discrepanța dintre rezultatele determinărilor paralele nu depășește | A) - X 2 \<

< 0,01яЖ, где Xi, Х 2 и X- результаты первого и второго параллельных определений и их среднеарифметическое, a d- норматив контроля сходимости, то среднеарифметическое X принимают за результат анализа. В противном случае анализ повторяют. Значение норматива контроля сходимости d приведено в таблице 1.

Pe baza rezultatului X al analizei obţinute şi a valorii erorii relative q din tabelul 1, se calculează eroarea absolută A = 0, (SD mg/kg sau %).

Rezultatul analizei este prezentat ca (X ± A), mg/kg sau% la P = 0,95.

4.5 Controlul acurateței rezultatelor analizei

Controlul operațional intern (EQA) al calității rezultatelor analizei include controlul convergenței, reproductibilității și acurateței rezultatelor analizei.

4.5.1 Repetabilitatea determinărilor paralele este controlată pentru fiecare probă analizată în conformitate cu 4.4.

4.5.2 Utilizați mostre de lucru pentru controlul intern al reproductibilității. Proba este împărțită în două părți egale și analizată conform metodologiei în laboratoare diferite sau într-un singur laborator, variind pe cât posibil condițiile de analiză, adică se folosesc diferite seturi de sticlă volumetrică, analizele se efectuează pe diferite zile sau de către doi analiști diferiți.

Reproductibilitatea analizelor de control este considerată satisfăcătoare dacă \ X ^ - X 2 \<

< 0,01 DX, где X/, Х 2 и X- результаты анализа одной и той же пробы, полученные в разных лабораториях или при варьирующих условиях в одной лаборатории и их среднеарифметическое значение, D - значение норматива внутреннего оперативного контроля воспроизводимости. Значение норматива D приведено в таблице 1.

GOST R 51650-2000

Frecvența controlului reproductibilității este de cel puțin o dată la două săptămâni.

Tabel 1- Domeniul de măsurare, valoarea caracteristicii erorii relative și standardele de control operațional al componentei aleatorii a erorii relative (convergență și reproductibilitate) la un nivel de încredere de P = 0,95

4.5.3 Pentru a controla precizia, utilizați mostre de lucru cu un adaos cunoscut de benzo (a) piren. Proba este împărțită în două părți egale, dintre care una este analizată în conformitate cu procedura; în al doilea, se introduce un aditiv cunoscut de benzo (a) piren și apoi se analizează, de asemenea, în conformitate cu procedura. Cantitatea de aditiv ar trebui să fie de 50 - 150% din conținutul de benzopiren din proba analizată.

Precizia analizelor de control este considerată satisfăcătoare dacă \ Xy-X-c \< 0,01 К, где Ху, Xи с - результаты контрольных анализов пробы с добавкой бенз(а)пирена, реальной пробы и величина добавки бенз(а)пирена, соответственно; К- норматив оперативного контроля точности. Норматив оперативного контроля точности рассчитывают по формулам: при проведении внутрилабораторного контроля (Р = 0,90)

K = 0,84 V (A X]) 2 + (A x) 2; (4)

în timpul controlului extern (P = 0,95)

K = V (A ^) 2 + (A z) 2, (5)

unde A ^ + A x sunt valorile caracteristicii de eroare corespunzătoare concentrației de masă

benzo (a) piren în proba de aditiv și în proba reală;

Ay, = 0,01 Xy și A x = 0,01d x X, unde Xy și X sunt fracția de masă a benzo (a) pirenului din eșantion cu adăugare

și într-o probă reală,% sau mg/kg.

Valoarea erorii relative dx (8y) este dată în tabelul 1.

Precizia analizei este monitorizată cel puțin o dată pe lună, precum și la schimbarea reactivilor sau după o pauză lungă de lucru.

Dacă sunt depășite standardele pentru controlul operațional al preciziei, se efectuează analize repetate. Dacă standardele specificate sunt depășite din nou, analizele sunt suspendate, se află motivele care duc la rezultate nesatisfăcătoare și sunt eliminate.

Rezultatele EQA sunt înregistrate într-un jurnal special.

5 Metode de cromatografie lichidă de înaltă performanță și spectrofluorimetrie la temperatura camerei

Esența metodei constă în extracția hidrocarburilor, inclusiv benz (a) piren, cu hexan din produsul pretratat cu o soluție alcoolică de hidroxid de potasiu, izolarea unei fracțiuni de hidrocarburi aromatice policiclice care conține benzo (a) piren și purificarea fracției rezultate din impuritățile interferente pe o coloană cu Sephadex și într-un strat subțire de celuloză acetilată, urmată de determinarea cantitativă a benz (a) pirenului izolat prin cromatografie lichidă de înaltă performanță sau spectrofluorimetrie la temperatura camerei.

Gama valorilor determinate ale fracției de masă a benz (a) pirenului în produsele analizate folosind metoda cromatografiei lichide de înaltă performanță și metoda spectrofluorimetriei la temperatura camerei 0,0001-0,002 mg / kg sau 0,1 x 10 - 7 - 2,0 x 10 -7%... Intervalul optim al concentrațiilor de masă determinate de benzo (a) piren în soluție atunci când se utilizează metoda cromatografiei lichide de înaltă performanță este de 0,01-0,02 μg / cm 3, când se utilizează metoda spectrofluorimetriei - 0,02-0,2 μg / cm 3.

Benzapirenul aparține clasei de hidrocarburi aromatice policiclice - HAP. Acesta este un grup de compuși organici, a căror structură chimică conține inele benzenice - grupuri de trei sau mai multe inele. Definiția chimică a benzopirenului: substanță organică care conține carbon aparținând grupului de hidrocarburi policiclice, cu o masă molară de 252,31 g/mol.

Ce este benzopirenul

Benzapirenul, ca toate HAP, este în principal rezultatul progresului tehnic, o consecință a activității umane. Principalele surse de poluare antropică cu HAP sunt arderea substanțelor organice solide și lichide, inclusiv petrolul și produsele petroliere, lemnul și deșeurile antropice. Dintre sursele naturale de benzopiren, merită remarcate incendiile forestiere, erupțiile vulcanice.

Cu toate acestea, formarea benzopirenului poate avea loc și fără procese de ardere - în timpul pirolizei, mocnirii, polimerizării.

Benzapirenul este eliberat în timpul fumatului: conținutul de benzopiren în fumul unei țigări este în medie de 0,025 μg, ceea ce este de multe ori mai mare decât MPC (în medie de 10.000 -15.000 de ori). S-a calculat că fumatul unei țigări în ceea ce privește conținutul de benzopiren este echivalent cu șaisprezece ore de inhalare a gazelor de eșapament.

Formula de Benzapiren

Există doi izomeri ai benzopirenului. Primul este 1,2-Benzapirene (3,4-benzpiren), care este conținut în toate produsele de ardere - ulei, gudron, cărbune, fum de diverse origini, inclusiv. În forma lor pură, acestea sunt cristale în formă de ac sau plăci de culoare galben deschis, cu un punct de topire de aproximativ 177 ° C.

4,5-Benzopiren - cristale sub formă de ace și plăci galben deschis, cu un punct de topire de 179 ° C. Conținut în gudron de cărbune, găsit în sol (în special în apropierea întreprinderilor și a autostrăzilor). Nu are proprietăți mutagene, cancerigene.

Formula chimică a benzopirenelor este C20H12.

Benzapiren în sol și aer

Benzapirenul practic nu apare în stare liberă, ci se depune întotdeauna pe particulele conținute în aer. Împreună cu masele de aer în mișcare, benzopirenul se răspândește pe o suprafață mare și căderea împreună cu particulele solide din aer (de exemplu, în timpul precipitațiilor) cade în straturile de sol, corpurile de apă, pe suprafața clădirilor.

Sursa sa, transportul rutier, joacă, de asemenea, un rol în migrarea și acumularea benzopirenului. Pe de o parte, atunci când parcurg distanțe lungi, mașinile contribuie la distribuirea uniformă a benzopirenului. Pe de altă parte, benzopirenul sedimentat se acumulează în cantități mari de-a lungul autostrăzilor și la obiectele din apropierea acestora (așa-numitele „surse secundare”).

Benzapirenul este ușor „inclus” în ciclul substanțelor din natură: cu precipitații atmosferice, care conține întotdeauna particule solide, este introdus chiar și în zone departe de sursa principală de HAP, intră în corpurile de apă, de unde, în timpul evaporării, se ridică. din nou în aer. Această capacitate a benzopirenului de a migra este cea care duce la faptul că conținutul său poate fi ridicat în locurile în care nu există o sursă puternică a acestei substanțe.

Intrând în mediul înconjurător și acumulându-se în acesta, benzopirenul pătrunde în plante, care ulterior servesc ca furaj pentru animale sau sunt folosite în alimentația umană. Concentrația de benzopiren în plante este mai mare decât conținutul său în sol, iar în alimente (sau furaje) este mai mare decât în ​​materiile prime pentru fabricarea lor. Acest efect de creștere a concentrației de substanțe chimice, inclusiv benzopiren, se numește bioacumulare.

Astfel, benzopirenul este periculos nu doar ca poluare de fond a mediului, ci și ca substanță care pătrunde în organism prin lanțul trofic.

MPC benzopiren

Principala metodă de determinare și control al benzopirenului este cromatografia lichidă.

Conform Standardelor de igienă 2.1.6.695-98 și 2.1.6.1338-03, cantitatea medie zilnică maximă admisă de benzopiren în aer (MPCss) este de 0,1 μg/100 m3 sau 10-9 g/m3, iar MPC-ul acesteia în sol conform Standardelor Igienice 2.1.7.2041-06 - 0,02 mg/kg in total, tinand cont de nivelul de fond. În aerul de la locurile de muncă, concentrația maximă admisă medie de schimb nu este mai mare de 0,00015 mg / m3. (de la pct. 1 şi pct. 2. GN 2.2.5. 1313-03).

MPC de benzopiren în apă nu este mai mare de 0,000001 mg / l, în apa potabilă cu un sistem centralizat de alimentare cu apă - nu mai mult de 0,000005 mg / l. În apă potabilă îmbuteliată - de la cel mult 0,001 μg/l (apă de înaltă calitate) până la cel mult 0,005 μg/l în apă îmbuteliată de prima categorie de calitate.

În produsele alimentare în care prezența benzopirenului este permisă datorită caracteristicilor tehnologice, nivelul admisibil de benzopiren nu este mai mare de 0,001 mg / kg. Acestea includ: cârnați și produse care utilizează produse secundare, inclusiv cele afumate; bacon afumat; cârnați și produse afumate din carne și organe de pasăre; conserve afumate și conserve de pește, pește afumat; cereale alimentare.

Când se utilizează arome de fum, conținutul de benzopiren nu este mai mare de 2 μg / kg (l), iar după utilizarea lor, conținutul de benzopiren din produsele finite nu trebuie să depășească 0,03 μg / kg (l).

Benzopirenul nu este permis în alte produse alimentare.

Cu toate acestea, conform rezultatelor monitorizării, standardele pentru conținutul de benzopiren au fost depășite de multe ori. În medie, nivelul de poluare a aerului în orașe este de 5-12 ori mai mare decât MPC, în sol - de 3-7 ori, în alimente - de 1,5 până la 11 ori.

Efectul benzopirenului asupra corpului uman

Benzapirenul este clasificat ca substanță din clasa de pericol 1. Prima clasă de pericol o constituie substanțele cu un impact periculos extrem de mare asupra mediului, în timp ce modificările cauzate de acestea sunt ireversibile și nu pot fi restabilite.

Benzapirenul este unul dintre cele mai puternice și totuși răspândite cancerigene. Fiind stabil din punct de vedere chimic și termic, având proprietăți de bioacumulare, intră și se acumulează în organism și acționează constant și puternic. Pe lângă cancerigen, benzopirenul are efecte mutagene, embriotoxice, hematotoxice.

Modalitățile de pătrundere a benzopirenului în organism sunt variate: cu alimente și apă, prin piele și prin inhalare. Gradul de pericol este indiferent de modul în care benzopirenul intră în organism. În experimente, precum și conform datelor de monitorizare din zone ecologic nefavorabile, benzopirenul este introdus în complexul ADN, provocând mutații ireversibile care sunt transmise generațiilor ulterioare. De o preocupare deosebită este faptul bioacumulării benzopirenului: probabilitatea mutațiilor în generațiile următoare de descendenți crește din cauza bioacumulării de multe ori.

VREI SA RENUNCI DE fumat?

Atunci ne poți alătura la un maraton de renunțare la țigări.
Va fi mult mai ușor să renunțați.

4.1.2. Tehnica de măsurare a fracției de masă a benzo (a) pirenului din materii prime alimentare, produse alimentare și sol prin cromatografie lichidă de înaltă performanță

Scopul și domeniul de aplicare

Tehnica este destinată pentru determinarea cantitativă a benzo (a)pirenului (BP) în materii prime alimentare, produse alimentare și sol la fracția sa de masă indicată în tabel. 1. Limita inferioară a domeniului de măsurare corespunde cu 1/2 din nivelul (conținutul) permis al toxinei în produse și materii prime, limita superioară la de cinci ori nivelul admisibil.

Benz (a) pirenul este un compus cancerigen foarte toxic, iar conținutul său admis în produsele alimentare și materiile prime alimentare este stabilit prin Normele și Normele Sanitare SanPiN 2.3.2.560-96.

Tehnica poate fi aplicată de instituțiile Supravegherii Sanitare și Epidemiologice de Stat din Federația Rusă, laboratoare ale altor organizații și întreprinderi legate de cercetare, analiză chimică și certificare a produselor alimentare. Metodologia nu este arbitrajul.

Orez. 11.14.

• 1. Naftalină 9. Crisen (0,17 *)
• 2. Acenaftenă (1,40 *) 10. Benz (a) piren
• 3. Fluoren (2,60 *) 11. Benz (b) fluoranten (0,26 *)
• 4. Fenantren * 2,40 *) 12. Benz (c) fluorantren (0,10 *)
• 5. Antracen (0,13 *) 13. Benz (a) piren (0,2 *)
• 6. Fluoranten (0,74 *) 14. Dibenz (a, b) antracen
• 7. Piren (0,67 *) 15. BeH3 (g, h, i) nepHaen (0,21 *)
• 8. Benz (a) antracen (0,07 *) 16. Indeno (1,2,3-cc1) piren (0,26 *)

Conditii de analiza:

Coloană: Supelcosil® LC RAS ​​​​(250 mm x 2,1 mm; 5 μm);

Gradient: Acetonitril (A) 50-100%, apă (B) 50-0%; 200 μl / min Temperatura: 25 ° С Volumul probei: 10 μl Detectare: СGripa, conform programului

Caracteristicile incertitudinii de măsurare

Limitele erorii relative (± 5) a rezultatului măsurării fracțiunii de masă a BP (cu un nivel de încredere de 0,95) sunt prezentate în tabel. 1.

Tabelul 1. Obiecte analizate, intervale și caracteristici ale măsurătorilor

Grup de produse (obiect analizat)	Conținut valid ( IV X), mg/kg	Gama de măsurare a fracțiunii de masă BP, mg / kg	Coeficient extracţie,	Limitele erorii relative (± 8), %
Carne afumată, pește și produse grase

Instrumente de măsură, dispozitive auxiliare, materiale și reactivi

Instrumente de masura

Cromatografe lichide:

• - Microcoloană „Milichrom-5”, TU 25-7405.0009-89, versiunea 3 cu detector fluorimetric (FLD) (Opțiunea 1).
• - Cromatograf lichid izocratic sau gradient, de exemplu "Kpayer" (Germania), Registrul de stat al instrumentelor de măsurare al Federației Ruse 16848-97 sau atașament cromatografic "HPZhKh-3", LLP "Lumex" (Sankt. Petersburg), echipat cu FLD "Fluorat-02" -2M ", LLP" Lumex ", Registrul de stat al instrumentelor de măsurare al Federației Ruse 14093-99 (Opțiunea 2).
• - Cromatograf lichid izocratic sau gradient cu orice tip de FLD, de exemplu "Kpayer" (Germania), Registrul de stat al instrumentelor de măsurare al Federației Ruse 16848-97 (Opțiunea 3).

Coloane cromatografice „Diasfer-110-S 16”, TU 4215-001-05451931-94, CJSC „BioKhimMak ST” (Moscova), cu dimensiuni standard corespunzătoare variantei sistemului cromatografic:

• - 2 x 80 mm, dp = 5 - 7 microni (Opțiune 1)
• - 2 x 150 mm, dp = 5 - 7 microni (Opțiunea 2)
• - 4 x 150 mm, dp = 5 - 7 microni (Opțiunea 3)

Complexul hardware și software „MultiChrome-Spectrum”, TU AZHRT

3.036.001, CJSC „Ampersand” (Moscova), sau orice alt software care permite calibrarea și determinarea cantitativă prin metoda unui standard extern.

GSO 7515-98 compoziție de soluție de benz (a) piren în acetonitril cu concentrație de masă de benz (a) piren de 100 μg / cm 3, AOZT "Ekros" (Sankt Petersburg).

GSO 7064-93 compoziție de benz (a) piren soluție în hexan cu benz (a) concentrație de masă piren 100 μg / cm 3, AOZT "Ekros" (Sankt Petersburg).

Cantar electronic de laborator 4 cl. acuratețea modelului VLE 134, GOST 24104-88 sau altele.

Microseringi, 100 μL Hamilton, Model Microliter # 1710 sau echivalent.

Micropipete 0,5; 0,2; 0,1 μl; GOST 20292-74.

Cilindrii de măsurare 2-25,2-50, 2-100 și 2-500, GOST 1770-74.

Baloane cotate 2-10-2, 2-100-2, GOST 1770-74.

Pipete gradate 1, 2, 5, 10 cm 3, GOST 29227-91.

Reactivi si materiale

Acetonitril pentru cromatografie lichidă, OP-3 grad de puritate ridicată, TU 6-09-14-2167-84, rectificat.

Apă dublu distilată, TU 6-09-2502-77.

Hexan, pur chimic, TU 6-09-3375-78, uscat pe Na 2 S 04 rectificat.

Benzen, chimic pur, GOST 5955-75, uscat pe Na 2 S 04 rectificat.

Sulfat de sodiu anhidru, pur chimic, GOST 4166-76.

Cartușe de concentrare „Diapak”: A-3, P-3, S; TU 4215-002-05451931-94, CJSC BioKhimMak ST (Moscova).

Dispozitive de asistare

Sistem de filtrare și degazare a eluanților ZAO BioKhimMak ST (Moscova) sau alții.

Fiole de sticlă pentru soluții de calibrare și analiză cu o capacitate de 1,8 și 5,0 cm 3 cu capace filetate și garnituri din teflon de la Supelco, numere de catalog 2-6951, 2-7037 și

2-7039 sau similar.

Micro-mixer PPE-3, „Ekros” (Sankt Petersburg).

Evaporator rotativ IR-1M2, TU 25-1173.102-84 sau altele.

Baloane cu fund ascuțit cu dopuri cu o capacitate de 25, 10 și 5 cm 3, GOST 25336.

Un dispozitiv pentru striparea soluțiilor într-un curent de azot, echipat cu un bloc de aluminiu termostat (baie de aer uscat) JV "BioMark" (Lvov) sau altele.

Filtre cu membrană cu dp = 0,4-0,5 microni.

Un dispozitiv pentru crearea unui vid de aproximativ 7 mm Hg. Artă. (pompa cu jet de apa, GOST 25336; pompa de vid cu inel de apa "Begemot", UVK-RK2 / 1, JSC "BioKhimMak ST", Moscova).

Dispozitiv de vid pentru prepararea probei (colector de vid) sau altele cu receptoare de probe cu o capacitate de cel puțin 10 cm3.

Balon Büchner, pâlnie Bunsen cu o capacitate de cel puțin 500, respectiv 200 cm 3, GOST 1770.

Pâlnie de separare cu o capacitate de 100 și 500 cm 3, GOST 25336.

Baloane conice cu fund plat, cu dopuri, cu o capacitate de 50, 100 și 250 cm 3, GOST 25336.

Baloane în formă de pară cu dopuri cu o capacitate de 50 și 100 cm 3, GOST 25336.

Pâlnie conică cu un diametru de cel puțin 10 cm, GOST 1770.

Hârtie de filtru de tip „panglică albastră”.

Vată medicală nesterilă, bumbac.

Metodă de măsurare

Tehnica include următoarele proceduri de bază:

• - extracția primară cu hexan și reextracția în acetonitril BP dintr-o probă de produs afumat;
• - extracția primară a BP cu un amestec de acetonitril-apă dintr-o probă de cereale sau de sol;
• - concentrarea și purificarea extractului primar prin extracție în fază solidă;
• - diluarea extractului de probă preparat cu un amestec acetonitril-apă;
• - calibrarea cromatografului prin soluţii cu o valoare cunoscută a concentraţiei masice a BP;
• - analiza solutiei extractului de proba preparat prin cromatografie lichida de inalta performanta (HPLC) cu inregistrarea semnalului de fluorescenta;
• - identificarea TA determinată prin parametrii de retenție;
• - calculul concentrației masei BP pe baza semnalului analitic înregistrat și a caracteristicilor de calibrare;
• - calculul fracției masice de BP, pe baza concentrației masice de BP, masa probei alimentare și volumul soluției de extract preparat.

Cerințe de siguranță

Când lucrați cu compușii chimici utilizați, este necesar să respectați cerințele de siguranță stabilite pentru lucrul cu substanțe toxice, caustice și inflamabile, GOST 12.1.018-86 și GOST 12.1.004-76, cerințe de siguranță la incendiu, GOST 12.1.004 -76.

Dacă soluțiile BP ajung pe piele „sau pe suprafața obiectelor, este necesar să le tratați cu apă și detergent și apoi cu alcool etilic. Soluțiile trebuie păstrate la frigider într-un ambalaj sigilat.

Când se operează sistemul pentru HPLC și se efectuează măsurătorile corespunzătoare, este necesar să se respecte regulile de siguranță electrică, GOST

12.1.019-79 și instrucțiuni de utilizare a dispozitivului.

Cerințe de calificare a operatorului

Persoanele au voie să lucreze:

• - calificat ca inginer chimist sau tehnician chimist;
• - cu experienta intr-un laborator chimic;
• - a promovat cursurile de formare relevante și stagiile de practică în laboratoare acreditate pentru efectuarea de analize folosind HPLC;
• - au primit rezultate pozitive la efectuarea operațiunilor de control.

Conditii de masurare

Pregătirea probelor, prepararea soluțiilor, prepararea și măsurătorile se efectuează la o temperatură ambiantă de 18-25 ° C, presiune atmosferică 84,0-100,7 kPa (630-800 mm Hg), umiditatea aerului nu mai mult de 80% (la temperatura 25 ° C). C).

La efectuarea măsurătorilor în laborator trebuie îndeplinite următoarele condiții: tensiunea în rețea este de 220 ± 10 V, frecvența curentului în rețea este de 50zh 1 Hz. Măsurătorile se efectuează în condițiile recomandate de descrierea și instrucțiunile de utilizare a dispozitivului.

Pregătirea pentru a face măsurători

Sticlărie

Înainte de utilizare ulterioară, sticla folosită se clătește cu ultimii solvenți utilizați și se spală bine cu apă fierbinte cu orice detergent praf, se clătește secvențial cu apă distilată și bidistilată și se usucă. Păstrați vasele curate cu un tampon de plută sau de bumbac.

Prelevare, depozitare și manipulare

Eșantionarea și evaluarea medie a probelor se efectuează în conformitate cu documentele de reglementare pentru fiecare tip de produs (GOST 13586.3-83, GOST 27668-88, GOST 9792-73, GOST 7631-85). BP determinată se extrage din probele de produse afumate prin extracție cu hexan uscat, după evaporarea căruia se extrage din nou în acetonitril. La extragerea BP din mostre de cereale sau sol, se folosește un amestec de apă-acetonitril (16:84). Concentrarea și purificarea ulterioară a extractului primar al probei care conține BP, indiferent de natura produsului inițial, se realizează în conformitate cu schema complexă de extracție în fază solidă folosind trei cartușe de concentrare diapak A-3, P-3, C. .

Probele preparate (extractele de probe) sunt dizolvate într-un amestec de acetonitril-apă (70:30).

Fiecare măsurare a fracției de masă a BP include prepararea și analiza cromatografică a cel puțin două probe.

Prepararea amestecurilor de solvenți

Amestecuri de solvenți se prepară prin metoda volumetrică în cilindri gradați. Volumele necesare de acetonitril și apă sunt măsurate cu cilindri gradați separati și apoi amestecate. Extractant A: amestec de acetonitril-apă (84:16).

Prepararea extractanților

Pentru prepararea acetonitrilului și hexanului saturați reciproc, aproximativ 300 cm3 de acetonitril și 100 cm3 de hexan sunt agitați într-o pâlnie de separare cu o capacitate de 500 cm3. După stratificarea solvenților, straturile sunt separate separat: cel inferior (acetonitril saturat cu hexan - extractant B) și cel superior (hexan saturat cu acetonitril - extractant C), interfaza este aruncată.

Prepararea eluanților

Pentru măsurătorile HPLC, amestecurile acetonitril-apă sunt preparate în următoarele rapoarte: (90:10) - eluent 90, (84:16) - eluent 84, (80:20) - eluent 80, (70:30) - eluent 70 Eluanții gata sunt filtrati printr-un filtru cu membrană și se efectuează degazarea în vid sau termică.

Pregatirea solutiilor de calibrare

GSO al compoziției soluției BP în acetonitril (vezi mai sus) este diluat cu un amestec de acetonitril-apă (7: 3) înainte de utilizare. Luați cu o pipetă

1,0 cm 3 din soluția stoc, se pune într-un balon cotat cu o capacitate de 100 cm 3 și se adaugă solventul la semn. Apoi, cu ajutorul unei pipete, se iau anumite volume din soluția rezultată, se pun într-un balon cotat cu o capacitate de 10 cm 3 și se adaugă solventul la semn. Volumele corespunzătoare de soluții utilizate pentru diluare și concentrația soluțiilor de calibrare 2-5 (Opțiunea 1) și 3-7 (Opțiunile 2, 3) sunt prezentate în tabel. 2. Când se utilizează compoziția GSO de soluție BP în hexan (vezi mai jos), după evaporarea solventului în condițiile prezentate mai jos, reziduul uscat este redizolvat în acetonitril și diluat așa cum este descris mai sus, ținând cont de valoarea concentrației certificate de GSO.

Masa 2. Soluții de calibrare pentru analiza benzopirenului (BP).

Concentrația de masă BP (valoarea certificată a GSO), μg / cm 3	Soluție stoc pentru diluare		Calibrare
				Concentrația masei BP, μg/cm 3

* Nu este utilizat pentru calibrarea directă a sistemului cromatografic.

Pregătirea sistemului cromatografic

Cromatograful este pornit și pregătit pentru funcționare în conformitate cu descrierea și manualul de utilizare. Setați coloana „Diasfer-110-C 16” cu dimensiuni standard în conformitate cu opțiunea cromatograf (vezi mai sus). Eluentul cu cea mai mare concentrație de acetonitril este pompat prin sistemul cromatografic până la stabilizarea liniei de bază a detectorului, iar apoi este condiționat în condițiile inițiale ale gradientului conform secțiunilor corespunzătoare „Condiții de analiză”.

Pregătirea cartuşelor de concentrare

Cartușele de concentrare Diapak A-3 și P-3 sunt pregătite pentru funcționare după cum urmează:

• 1. Într-o carcasă din polipropilenă cu un volum de 10 cm 3 cu filtru înlocuibil în partea inferioară, se toarnă 3 cm 3 de diapak uscat A sau sorbent P. Partea goală superioară a carcasei este folosită ca pâlnie pentru aplicarea unui proba sau eluent.
• 2. Montați cartușul vertical într-un dispozitiv de evacuare adecvat și atingeți un strat superior orizontal uniform de sorbant. Pentru pregătirea finală a cartuşului Diapak A-3, este suficient să fixaţi stratul absorbant cu un mic tampon de bumbac.
• 3. Pentru a pregăti cartuşul Diapak P-3, sorbentul se spală secvenţial cu 10 cm 3 de benzen, acetonă şi extractant A cu evacuare slabă (viteza de picurare nu mai mult de 1-2 picături pe secundă), împiedicând intrarea aerului în sorbent. După umplerea cartuşului cu acetonă, sorbentul se lasă să se depună, se introduce filtrul superior polimeric, se compactează peste stratul superior al sorbantului şi se continuă clătirea. La atingere extractant A la un nivel de 2-3 cm deasupra filtrului se oprește spălarea și se etanșează cartușul cu un dop inferior și un capac superior (pentru depozitare). În caz de uscare accidentală, cartuşul este spălat extractant A.Înainte de aplicarea probei, dopurile sunt îndepărtate și, sub evacuare slabă, resturile de amestec apă-acetonitril se trec la nivelul filtrului superior, apoi se toarnă imediat soluția de testare. Regenerarea cartuşului reutilizabil Diapak P-3 se realizează conform unei scheme similare, excluzând îndepărtarea filtrului superior.

Cartușul de concentrare diapak C este pregătit pentru funcționare după cum urmează:

• 1. O capsulă de polipropilenă finisată cu 1 cm 3 de sorbent Diapak C este sigilată cu dopuri. După îndepărtarea dopurilor, cartuşul este pregătit pentru lucru prin trecerea a 5 cm 3 de hexan prin el cu o seringă la o viteză de picurare de 1-2 picături pe secundă.
• 2. Proba se aplică gravitațional, folosind o cutie goală din polipropilenă cu un volum de 10 cm 3 ca pâlnie, fixată strâns în fitingul superior al capsulei Diapak C.

Pregătirea probei pentru măsurători

Extracția benz (a) pirenului cu hexan dintr-o probă de produs afumat O porție cântărită de 10,0 g dintr-o probă de produs afumat este măcinată într-un mojar cu 30 g sulfat de sodiu anhidru. Amestecul este transferat cantitativ într-un balon cu fund plat cu o capacitate de 100 cm3 şi extras cu hexan într-un volum de 40 cm3 timp de cel puţin 30 de minute sub agitare. Extractul primar de hexan din grăsimea totală a probei este decantat și trecut prin 10 g de sulfat de sodiu anhidru într-un balon de stripare. Procedura de extracție se repetă de două ori cu două volume de 20 cm3 de hexan și porțiuni din extract sunt trecute printr-un desicant în același balon de stripare. Hexanul este evaporat pe un evaporator rotativ la o temperatură care nu depășește 35 ° C până când mirosul dispare.

Extractul total de grăsime se dizolvă în 20 cm 3 extractant B, se transferă cantitativ într-un cilindru de măsurare cu o capacitate de 50 cm 3 şi se aduce volumul soluţiei la 40,0 cm 3 cu acelaşi solvent.

20,0 cm3 din soluția rezultată se transferă într-o pâlnie de separare cu o capacitate de 100 cm3 și se realizează reextracția BP în acetonitril în trei volume de 20 cm3. extractant B. De fiecare dată, realizând o separare cât mai completă a fazelor, stratul inferior (extract de acetonitril din BP) este prelevat și evaporat pe un evaporator rotativ la o temperatură care nu depășește 50°C. °C la un volum de 10-15 cm 3. Cantitativ (folosind acetonitril) se transferă soluția într-un cilindru de măsurare cu o capacitate de 25 cm 3, se aduce volumul la 21,0 cm 3 cu acetonitril, se adaugă 4,0 cm 3 de apă bidistilată și se amestecă bine rezultatul. extract apă-acetonitril de BP.

Extracția benzo (a) pirenului dintr-o probă de cereale sau de sol cu ​​un amestec de acetonitril-apă

O porție cântărită de 10-25 g de probă se transferă într-un balon cu fund plat, se adaugă 50-125 cm 3 extractant A, respectând cu strictețe raportul 1: 5 dintre porțiunea cântărită a produsului și volumul extractantului și agitând timp de 1 oră. Filtru extract apă-acetonitril de BP printr-un filtru de hârtie pe o pâlnie Buchner sub vid și stoarceți tortul pe filtru.

Prepurificare și concentrare a extractului primar de cereale sau produs afumat

Treceți prin cartuş Diapak A-3 25,0 cm 3 și apoi 3 cm 3 extractant A cu o rată de picurare de 2-3 picături pe secundă într-un balon receptor.

Eluatul colectat este trecut prin cartuşul preparat Diapak P-3, apoi 5 cm3 de acetonitril la o viteză de picurare de 1-2 picături pe secundă, aruncând spălările. Fracţia ţintă care conţine BP este eluată din cartuş cu un amestec de benzen-acetonitril (1:1) într-un volum de 7 cm3 cu o viteză de 1-2 picături pe secundă într-un balon de stripare. Eluatul este evaporat pe un evaporator rotativ la o temperatură care nu depășește 50 ° C, se adaugă 0,5 cm 3 de hexan în balon și se agită bine într-un micro-mixer până când reziduul uscat este complet dizolvat.

Prepurificare și concentrare a extractului primar de sol

Treceți prin cartuş Diapak A-3 5,0 cm 3 extract de apă-acetonitril BP, apoi 3 cm 3 extractant A cu o rată de picurare de 2-3 picături pe secundă într-un balon receptor. Transferați eluatul într-un cilindru de măsurare cu o capacitate de 25 cm3, clătiți balonul cu două volume de 5 cm3 extractant Ași aduceți volumul soluției din cilindru la 20 cm 3.

Se trece prin cartuşul Diapak P-3 pregătit 5,0 cm 3 de eluat diluat, apoi 5 cm 3 de acetonitril cu o viteză de picurare de 1-2 picături pe secundă, aruncând spălaturile. Fracţia ţintă care conţine BP este eluată din cartuş cu un amestec de benzen-acetonitril (1:1) într-un volum de 7 cm3 cu o viteză de 1-2 picături pe secundă într-un balon de stripare. Eluatul este evaporat pe un evaporator rotativ la o temperatură care nu depășește 50 ° C, se adaugă 0,5 cm 3 de hexan în balon și se agită bine într-un micro-mixer până când reziduul uscat este complet dizolvat.

Purificarea fină a extractului

Se aplică gravitațional 0,5 cm 3 dintr-o soluție de probă în hexan pe cartuşul Diapak C preparat, apoi se spală balonul cu două porții de 0,5 cm 3 de hexan și se aplică ulterior pe cartuş, eliminând toate spălările. BP este eluat cu benzen într-un volum de 2,0 cm 3 cu o viteză de picurare de 1-2 picături pe secundă într-un balon de stripare și evaporat pe un evaporator rotativ la o temperatură care nu depășește 50 ° C. Se dizolvă reziduul uscat al extractului de probă BP într-un amestec de acetonitril-apă (7: 3), ale cărui volume sunt indicate în secțiunile „Condiții de măsurare” pentru fiecare variantă a sistemului cromatografic (vezi mai jos).

Calibrare și Măsurare

Calibrarea cromatografului

Cromatograful este calibrat prin introducerea secvenţială (în condiţiile măsurării BP) a volumului nominal al soluţiilor de calibrare (Tabelul 2) în ordinea creşterii concentraţiilor lor masice. Fiecare soluție este injectată în cromatograf de cel puțin două ori. Cu reglarea corectă a sistemului cromatografic, înălțimea vârfului în cromatograma soluției de calibrare cu cea mai mică concentrație ar trebui să depășească nivelul de zgomot de bază de cel puțin 10 ori.

După prelucrarea matematică a cromatogramelor, parametrii de retenție și zonele de vârf sunt înregistrate și sunt reprezentate grafic caracteristicile de calibrare (GC), reflectând dependența valorii medii a zonei de vârf de concentrația masei BP din soluția de calibrare.

Este monitorizată corectitudinea construcției caracteristicii de calibrare.

Caracteristica de calibrare este refăcută la schimbarea coloanelor, după efectuarea lucrărilor de întreținere și reparații, cu rezultate negative ale controlului stabilității GC (vezi mai jos).

Determinarea benzo (a) pirenului

Condiții de măsurare (Opțiunea 1)

Pentru analiză, extractul preparat din proba de BP este dizolvat în 0,1 cm3 dintr-un amestec de acetonitril-apă.

Modurile de operare ale FMD și UVPA sunt setate de la tastatura computerului în conformitate cu Manualul utilizatorului (PAK „MultiChrom-Spectrum”) și controlate pe monitoare în următoarea formă:

Detector fluorometric

• lungime de undă de excitație 296 nm;
• lungime de undă de emisie - filtru de lumină nr. 2 (mai mult de 380 nm);
• timp de măsurare 0,2 s.

Dozator automat

• volumul de regenerare este de 0,4 cm 3;
• volumul probei 0,04 cm 3;
• debit 0,15 cm 3 / min;
• viteza setată 0,3 cm 3 / min;
• timpul de retenție al TA 11 min.
• compoziţia eluanţilor din vase şi schema de întocmire a gradientului de acetonitril sunt prezentate în tabel. 3.

Tabelul 3. Eluanți

Condiții de măsurare (Opțiunea 2)

Pentru analiză, extractul preparat (vezi mai sus) din proba BP este dizolvat în 0,5 cm3 dintr-un amestec de acetonitril-apă.

• filtrul de pe linia de excitație - "X4";
• filtru de linie de emisie - "ХЗ";
• volumul probei 0,02 cm 3;
• sensibilitatea este medie;
• netezire - 4;
• nivelul „fond” este selectat în funcție de rezultatele înregistrării cromatogramei de testare a soluției de calibrare nr. 3.

• debit 0,2 cm 3 / min;
• eluent 84;
• timpul de retenție al TA este de aproximativ 12 min.

Modul de separare a gradientului:

• debit 0,25 cm 3 / min;
• eluent 100 în eluent 70în 20 de minute;

Condiții de măsurare (Opțiunea 3)

Pentru analiză, extractul preparat din proba de BP este dizolvat în 0,5 cm3 dintr-un amestec de acetonitril-apă.

• lungime de undă de excitație 375 nm;
• lungime de undă de emisie 405 nm;
• debit 0,8 cm 3 / min;
• volumul probei 0,02 cm 3;
• constanta de timp 1,0 s.

Modul de separare izocratică:

• eluent 84;
• timpul de retenție al TA este de aproximativ 12 min;

Modul de separare a gradientului:

• gradient liniar de la 30 la 70% eluent 100 în eluent 70în 20 de minute;
• timpul de retenție al TA este de aproximativ 14 min.

Obținerea și prelucrarea cromatogramelor

Soluția de extract de probă este introdusă în cromatograf de două ori. Identificarea BP se realizează pe baza comparării parametrilor de retenție ai vârfurilor din cromatogramele extractului de probă și soluțiilor de calibrare. Parametrii de retenție aproximativi sunt dați în secțiunile Condiții de măsurare. Identificarea fiabilă a compusului care trebuie determinat corespunde diferenței dintre valorile parametrilor de retenție pentru soluția de calibrare și probă, care nu depășește 0,2 min.

Diluarea soluției de extract

Se efectuează dacă concentrația de masă a BP determinată depășește cea mai mare concentrație de masă a sa în soluțiile de calibrare. Soluția de extract se diluează la jumătate (raport de diluție, dil = 2), luând volume egale din această soluție și amestecul de acetonitril-apă (70:30) și amestecând acesta din urmă. Dacă o singură diluție nu elimină „off-scale”, procedura se repetă (raport de diluție, dil = 4).

Prelucrarea rezultatelor măsurătorilor

Se calculează valoarea medie a zonei vârfului (semnalul de ieșire al cromatografului) pentru două injecții ale soluției de extract de probă în cromatograf. Controlați convergența semnalelor de ieșire (vezi mai jos).

Dependența de calibrare este utilizată pentru a găsi valoarea concentrației de masă a BP în soluție, care corespunde valorii medii a zonei vârfului.

Fracția de masă a BP (I ^), mg / kg, în proba i-a (rezultatul determinării) se calculează prin formula

unde Sbp este concentrația de masă a analitului în soluția extractului din proba i-a de BP, μg / cm 3 (calculată din dependența de calibrare, pe baza valorii medii a zonei vârfului); V p- volumul soluției de extract a probei i-a de BP, cm 3; R- gradul de extracție a BP în stadiul de pregătire a probei conform tabelului. 2; Meq- masa unei părți a probei, corespunzătoare fracției din extractul apă-acetonitril de BP utilizată pentru purificare și determinarea cromatografică ulterioară; - masa echivalentă a probei, care este de 5,0 g (bob, produse afumate) sau 0,25 g (sol).

În cazul diluării extractului (a se vedea mai sus), fracția de masă a BP ( W, -, mg / kg) în măsura i-a se calculează prin formula

Unde Wj- valoarea obtinuta prin formula (II. 1), dil - gradul de dilutie (vezi mai sus).

Calculați valoarea medie a fracției de masă a BP pentru două probe (rezultatul analizei):

Convergența rezultatelor determinării fracției de masă a BP este controlată (vezi mai jos).

Înregistrarea rezultatelor măsurătorilor

Rezultatul analizei (măsurării) fracției de masă a BP în obiectul determinat este prezentat sub forma

Unde W - fracția de masă a BP, calculată prin formula (II.3).

Dacă unitatea de alimentare nu este găsită, rezultatul măsurării este prezentat în formular

unde P "ds este conținutul de BP admisibil conform tabelului 1.

Controlul erorilor MVI

Controlul convergenței semnalelor de ieșire ale cromatografului

Controlul se efectuează în timpul calibrării și analizei fiecărei probe în raport cu semnalele de ieșire (valorile zonelor de vârf BP pe cromatograme) obținute cu două injecții de soluție în cromatograf. Rezultatul controlului este considerat satisfăcător dacă intervalul semnalelor de ieșire, raportat la media aritmetică, nu depășește 8%.

Controlul corectitudinii construcției caracteristicii de calibrare

Controlul se efectuează la fiecare calibrare. Rezultatul controlului este considerat satisfăcător atunci când sunt îndeplinite condițiile pentru fiecare „-a soluție de calibrare”.

Unde Sj este valoarea medie a zonei vârfului BP pentru soluția de calibrare y "-a, a.u .; S) este valoarea zonei vârfului corespunzătoare caracteristicii de calibrare a concentrației masei BP în soluția de calibrare y "-a, c.u.

Controlul stabilității caracteristicii de calibrare

Controlul se efectuează zilnic înainte de începerea lucrului cu probele analizate folosind o soluție de control, care este utilizată ca soluție de calibrare cu o concentrație de masă BP corespunzătoare conținutului său permis în obiectul analizat.

Rezultatul controlului este considerat satisfăcător dacă condiția este îndeplinită

unde C ki este valoarea concentrației masice de BP în soluția de control, găsită din caracteristica de calibrare pentru valoarea medie a zonei vârfului, μg/cm 3; C la - valoarea concentrației masice de BP în soluția de control conform tabelului. 2.

Verificarea convergenţei rezultatelor determinării

Controlul se efectuează la fiecare analiză (măsurare). Rezultatul controlului este considerat satisfăcător dacă intervalul rezultatelor determinării, raportat la media aritmetică (rezultatul analizei), nu depășește 10%.

Controlul erorilor prin metoda de adăugare

Controlul se efectuează:

• a) înainte de a începe aplicarea prezentului MVI - fără greșeală;
• b) când apar rezultate dubioase ale determinării fracției de masă a TA;
• c) în conformitate cu planurile de control intern de laborator;
• d) la solicitarea organizaţiilor care controlează activităţile laboratorului.

Aditivul se formează pe baza unei soluții de calibrare. Cantitatea de aditiv (D, mg/kg) este ales astfel încât fracția de masă a BP din probă să crească de 1,5-2,5 ori. Calculul se face conform formulei

Unde C D- concentrația masică a BP în soluția de calibrare, μg/cm 3; Vo- volumul soluţiei de calibrare BP introdus în probă, cm 3; M zhw este masa echivalentă a probei prelevate pentru analiză, g.

Aditivul este introdus în extractul primar al unei probe de cereale sau de sol sub forma unei soluții de calibrare preparată conform tabelului. 2. Aditivul se introduce în extractul primar al produsului afumat sub formă de soluție de aceeași concentrație în hexan. În acest scop, GSO al compoziției BP în hexan (vezi mai sus) este diluat (ținând cont de corecția pentru valoarea concentrației certificate) în conformitate cu procedura de preparare a soluțiilor de calibrare (vezi mai sus), folosind hexan ca solvent și obţinerea unei soluţii de concentraţia necesară. Când se utilizează compoziția GSO BP în acetonitril, după evaporarea solventului, reziduul uscat este redizolvat în hexan și diluat cu hexan, așa cum este descris mai sus.

Analiza a două probe cu conținut natural de BP și a două probe cu adaos de BP se efectuează în aceleași condiții (un dispozitiv, o caracteristică de calibrare, un operator). Rezultatul controlului este considerat satisfăcător dacă condiția este îndeplinită

Unde W D- fracția de masă a BP în probele cu aditiv, mg/kg; W- fracția de masă a BP în probe fără aditiv, mg/kg ( W Dși W- valori medii ale fracției de masă pentru două probe cu rezultate pozitive ale controlului convergenței).

O ilustrare a aplicării acestei tehnici în ecoanalitica practică poate fi o cromatogramă și un grafic de calibrare pentru determinarea benzo (a)pirenului în alimente (Figurile 11.15 și 11.16).

Rezultatele monitorizării erorii în determinarea benzo(a)pirenului în obiecte prin metoda adiției cu detecția fluorometrică a 375 Ex / 405 Et (Opțiunea 3).

Nivelul de aditiv corespunde cu 0,5 conținut admis de benzopiren (0,0005 mg / kg - cereale și produse afumate, 0,01 mg / kg - sol).

Orez. 11.15.

Gradație componente: Coeficient de corelație BaP: 0,999667 Răspuns: Arie

Canal de referință 365 Ex / 405 Em

Formula Y = Ki X

Valorile 100 ( W D - L - D) / D sunt 10 și 16% pentru probele 1 și, respectiv, 2. Compusul de determinat în proba inițială de făină de grâu este prezent în cantitate de 0,00009 kg/kg.

Proba 1 - 0,00064 mg / kg Proba 2 - 0,00067 mg / kg

• În cazul general, caracteristica de calibrare are următoarele tipuri: S = AC + B, unde S este aria vârfului, a.u .; C este concentrația în masă a poluantului, μg/cm3; A și B sunt coeficienți.