Apliecība Nr.30-08, datēta ar 03.04.2008
FR.1.31.2008.01033

1. Mācību objekti

Šī mērīšanas procedūra attiecas uz kūpinātu gaļu, kūpinātām zivīm un trekniem produktiem, un tā nodrošina benzo(a)pirēna masas koncentrācijas noteikšanu ar augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfiju ar fluorimetrisko detektoru.

2. Mērīšanas diapazons

MPC benz(a)pirēnam treknos, kūpinātos gaļas un kūpinātu zivju produktos ir 1 µg/kg.

Metode paredz iegūt benzo(a)pirēna masas koncentrācijas mērījumu rezultātus 1. tabulā norādītajos diapazonos.

1. tabula. Benzo(a)pirēna masas koncentrācijas mērījumu diapazoni

Produkta veids	masas diapazons koncentrācija, mcg/kg	MPC, mcg/kg
tauku produkti	0,5 – 2,0	1,0
kūpināti gaļas produkti	0,5 – 2,0	1,0
kūpinātu zivju produkti	0,5 – 2,0	1,0

3. Parauga sagatavošana

Produktu paraugu ņemšana, konservēšana un uzglabāšana tiek veikta saskaņā ar GOST 7631, GOST 9792, TU un citu normatīvo dokumentāciju, kas reglamentē paraugu ņemšanu konkrētiem produktu veidiem.

Parauga sagatavošana sastāv no parauga ņemšanas posmiem (paraugu iepriekš atdzesē mīnus 12-18 °C temperatūrā 30 minūtes), malšanas, homogenizācijas ar bezūdens nātrija sulfātu, homogenizētā parauga ekstrakcijas ar heksānu kolbā, izmantojot ultraskaņas vanna, spontāna cietu nogulšņu izgulsnēšana (uz 1-2 min), ekstrakta attaukošana saldētavā (cilindru pievieno silikagelu, pievieno ekstraktu, cilindra saturu ievieto saldētavā), supernatanta heksāna slāņa tīrīšana ar cietās fāzes ekstrakciju, kas nav saglabājusies (uz Strata Silica Si-1 kārtridžiem) *, attīrot eluātu gaisa vai inertas gāzes plūsmā.

* Piezīme. Ja sākotnējā analizētā produkta tauku koncentrācija ir mazāka par 5%, sākotnējā parauga ekstraktam pēc sasaldēšanas jāpievieno neliels daudzums eluējošā reaģenta - etilacetāta (0,1 ml līdz 6 ml attīrītā ekstrakta).

4. Hromatogrāfiskās analīzes veikšana

4.1. Benz(a)pirēna kalibrēšanas šķīdumu, sagatavoto produktu paraugu HPLC analīzes iekārtas un apstākļi.

Lai veiktu benzo(a)pirēna hromatogrāfisko analīzi, ir jāizmanto izokrātiska augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfijas sistēma ar fluorimetrisko noteikšanu.

Lai veiktu analīzi, sākotnēji sagatavo kalibrēšanas šķīdumus no benzo(a)pirēna šķīduma heksānā vai no GRM no benzo(a)pirēna šķīduma acetonitrilā (šķīdinātājs tiek izpūsts, standarta paraugs ir atkārtoti izšķīdināts heksānā); veikt parauga sagatavošanu; sagatavot ierīci darbībai.

Aprīkojums:

šķidruma hromatogrāfs "Stayer" ar fluorimetrisko detektoru;

personālais dators ar instalēto programmatūru "MultiChrome for Windows XP" versija 1.5 vai 2x.

izokrātiskais režīms;

kolonna: Luna C18(2) 150x3,0 mm 3 µm (Phenomenex, ASV);

aizsargu kolonna: C18 4x3,0 mm (Phenomenex, ASV);

kustīgā fāze: acetonitrila/ūdens šķīdums (75:25);

plūsmas ātrums: 0,3 ml/min;

cilpas tilpums: 10 μl;

temperatūra: 50°C;

RFU diapazons: 0,01;

noteikšana: fluorimetriskā (λex: 365±2 nm; λem: 400-460 nm).

Kalibrēšanu veic, izmantojot kalibrēšanas šķīdumus (visā noteikto koncentrāciju diapazonā) vismaz reizi divās nedēļās, kā arī izmantojot jaunu reaģentu partiju, nomainot kolonnas un pēc hromatogrāfa remonta.

4.2. Benzo(a)pirēna kvantitatīvā satura noteikšana produkta paraugā.

Lai noteiktu produkta parauga komponenta (benzo(a)pirēna) kvantitatīvo saturu, tiek veikta viena kalibrēšanas šķīduma hromatogrāfiskā analīze un pēc tam sagatavotā parauga hromatogrāfiskā analīze. Lai nodrošinātu mērījumu ticamību, gan kalibrēšanas šķīduma, gan sagatavotā parauga hromatogrāfisko analīzi veic vismaz 2 reizes pēc kārtas.

Izmantojot instalēto programmatūru - "MultiChrome for Windows XP" atskaitē vai virs maksimuma (atkarībā no opciju "SKATS" iestatījumiem), mērījuma beigās rezultāts tiek automātiski noteikts koncentrācijas veidā hromatogrāfā ievadīto paraugu (bet ne sākotnējā paraugā, kas ņemts pētniecībai!).

Lai iegūtu rezultātu, ir jāveic vismaz divi paralēli mērījumi (iegūst divas hromatogrammas). Mērījumu rezultātu ņem kā vidējo aritmētisko benzo(a)pirēna saturu analizējamā parauga koncentrātā C xp, μg/l (aprēķināts no divām benzo(a)pirēna masas koncentrācijas vērtībām. analizētā parauga C 1 un C 2 koncentrāts).
benzo(a)pirēna masas daļa analizētajā paraugā (sākotnējā paraugā) X, mcg/kg aprēķina pēc formulas:

kur:
C xp - benzo(a)pirēna koncentrācijas vidējā vērtība, kas iegūta hromatogrāfijas rezultātā divos paralēlos mērījumos [ng/ml];
V 1 – sākotnējā ekstrakta tilpums, kas faktiski ir vienāds ar primārajai ekstrakcijai ņemtā heksāna tilpumu (50 ml);
V 2 - sasaldēšanai paņemtā ekstrakta (daļa no oriģināla) tilpums (30 ml);
V 3 ir ekstrakta tilpums (ekstrakta daļa pēc sasaldēšanas), kas ņemts SPE (6 ml) [ml];
V 5 ir gala ekstrakta tilpums, kura daļa tiek ievadīta hromatogrāfā (apmēram 3 ml) [ml];
K paraugu ņemšana – paraugu ņemšanas koeficients, kurā ņemta vērā ekstrakcijai ņemtā produkta parauga (jauktā ar nātrija sulfātu) masas proporcija no analīzei ņemtā parauga kopējās masas. Visos gadījumos tas ir vienāds ar 0,736;
K iesaldēt ir benzo(a)pirēna zudumu koeficients sasalšanas laikā. Visām pētīto produktu kategorijām šis koeficients ir vienāds un vienāds ar 0,95;
K papildus 1 ir primārās šķidruma ekstrakcijas ar heksānu koeficients. Visām pētāmo produktu kategorijām tas ir vienāds un vienāds ar 0,95;
K TFEextr.2– benzo(a)pirēna cietās fāzes ekstrakcijas koeficients, vienāds ar 0,95;
m pr. – augsne vai augsne, kas ņemta analīzei [g].

1. lapa

2. lpp

3. lpp

4. lpp

5. lpp

6. lpp

7. lpp

8. lpp

9. lpp

10. lpp

11. lpp

12. lpp

13. lpp

14. lpp

15. lpp

16. lpp

17. lpp

18. lpp

19. lpp

GOST 24104.

Rotācijas iztvaicētājs IR-1M.

GOST 25336.

Vannas ūdens.

Magnētiskais maisītājs tips MM-ZM ar elektrisko apsildi.

Hromatoskopa ultravioletais apgaismojums ar spektrālo diapazonu 250 - 700 nm un BUV-15 lampa kā UV starojuma avots.

Hromatogrāfiskā stikla kamera 40 x 40 x 40 cm.

Stikla plāksnes plānslāņa hromatogrāfijai 5 x 20 un 20 x 20 cm.

Stikla hromatogrāfijas kolonna 500 mm gara un 20 mm diametrā ar apakšā novilktu galu un rezervuāru ar ietilpību 50 - 60 cm 3 ПШ 14/23.

Ledusskapis ХПТ-2-400-29/32 ХС vai ХШ-1-400-29/32 ХС saskaņā ar GOST 25336.

Kopā ar tipu AIO-14/23-50 TS vai AIO-14/23-14/23-65 TS saskaņā ar GOST 25336.

Mērīšanas lineāls ar skalas dalījumu 0,1 cm saskaņā ar GOST 427.

Deflegmators 250-19 / 26-29 / 32 TS vai 300-19 / 26-29 / 32 saskaņā ar GOST 25336.

Sprausla P-1-19/26-14/23-14/23 TC vai H-2-19/26-14/23 TC saskaņā ar GOST 25336.

GOST 25336.

GOST 25336. Izmēru cilindri 1-100, 1-250 vai 3-100, 3-250 saskaņā ar GOST 25336.

Ķīmiskais stikls V-1-100 vai V-1-150 saskaņā ar GOST 25336.

Kolbas K-1-100-29/32 THS, K-1-25R-29/32 THS, K-1-500-29/32 THS vai P-1-500-29/32 THS saskaņā ar GOST 25336.

Bīhnera piltuve 1 vai 2, vai 3 saskaņā ar GOST 9147.

Krūzes svēršanai (pudeļu maisi) SV-14/8 vai SV-19/9, vai SV-24/10, vai SV-34/12 saskaņā ar GOST 25336.

MSH-10 tipa mikrošļirces, stikla kapilāri.

Universāls papīra indikators.

Laboratorijas filtrpapīrs saskaņā ar GOST 12026.

Skalpelis vai plāna lāpstiņa.

Rektificēts etilspirts saskaņā ar GOST R 51652 vai tehniskais rektificēts etilspirts saskaņā ar GOST 18300.

Acetonitrils saskaņā ar normatīvo dokumentu.

Celulozes mikrokristālisks pulveris saskaņā ar normatīvo dokumentu.

GOST R 51650-2000

Benz (v) krizēns, galvenās vielas saturs nav mazāks par 98%.

Sephadex LH-20.

Zīmola ASKG silikagels saskaņā ar normatīvo dokumentu.

Atļauts izmantot citus mērinstrumentus ar metroloģiskajiem raksturlielumiem un iekārtas ar tehniskajiem parametriem, kā arī reaģentus un materiālus, kuru kvalitāte nav zemāka par augstāk minēto.

5.2. Sagatavošanās pārbaudei

5.2.1. Šķīdinātāju sagatavošana

Šķīdinātājus (n.heksānu, etilspirtu, acetonu, benzolu) destilē parastajā veidā ar atteces dzesinātāju.

Dimetilformamīdu destilē, pievienojot destilācijas kolbā 120 cm 3 benzola un 36 cm 3 ūdens uz 1 dm 3 šķīdinātāja.

5.2.2. Celulozes acetāta sagatavošana

(50,0 ± 2,0) g mikrokristāliskās celulozes ievieto plakanā dibena kolbā ar tilpumu 500 cm 3, sagatavo maisījumu no 150 cm 3 benzola vai toluola, 70 cm 3 etiķskābes anhidrīda un 0,3 cm 3 sērskābes. atsevišķā kolbā pievieno. Reakcijas maisījumu maisa ar magnētisko maisītāju 6 - 8 h, atstāj bez maisīšanas vēl 18 h, pēc tam šķidro fāzi dekantē, un atlikumu ielej 300 cm 3 etilspirtā, maisa, atstāj spirtā uz. 24 h, pēc tam celulozi filtrē uz Buhnera piltuvi, mazgā ar 100 cm 3 etilspirta un destilētu ūdeni, līdz mazgāšana ir neitrāla (pēc indikatorpapīra).

Pēc tam pārbaudiet acetilētas celulozes hromatogrāfisko aktivitāti. Lai to izdarītu, 3-4 stundas pirms analīzes sagatavo etilspirta, acetona un ūdens maisījumu, kas ņemts tilpuma attiecībā 60:25:15, un ielej to hromatogrāfijas kamerā, kas izklāta ar filtrpapīra sloksnēm. Šķīdinātāja slāņa augstumam jābūt 1,5–2 cm kapilāram līdz 5 μl benz (a) pirēna šķīduma ar masas koncentrāciju 1 μg / cm 3. Plāksni ievieto hromatogrāfijas kamerā un atstāj kamerā, līdz šķīdinātāja līmenis paaugstinās vismaz par 100 mm no sākuma līnijas. Hromatogrāfijas beigās plāksni noņem, žāvē gaisā un zem ultravioletā starojuma lampas konstatē fluorescējošu zilu benzo(a)pirēna plankumu. Izmēra attālumu no starta līnijas līdz šķīdinātāja priekšpusei un līdz benzo(a)pirēna plankuma vidum; aprēķina Rj vērtību, kas nosaka benzo(a)pirēna kustības ātrumu uz plāksnes, pēc formulas:

kur XBP ir attālums no starta līnijas līdz benzo(a)pirēna punkta vidum, mm;

L ir attālums no starta līnijas līdz šķīdinātāja frontei, mm.

Benzo(a)pirēna Rj vērtībai jābūt 0,1.

Lai sagatavotu darba plāksni, 5 g acetilētas celulozes suspendē 20 cm 3 etilspirtā un vienmērīgā kārtā uzlej uz 20x20 cm plāksnes.

5.2.3. benzo(a)pirēna un benzo(b)krizola standartšķīdumu sagatavošana

(10,0+0,2) mg benzo(a)pirēna un benzo(b)krizēna iesver svēršanas kausos (pudeļu maisos). Paraugus kvantitatīvi pārnes mērkolbās ar ietilpību 100 cm 3: benz(a)pirēns-benzols, benzo(c)krizēns-acetonitrils, pēc tam benz(a)pirēna šķīduma tilpumu noregulē līdz atzīmei ar benzolu, šķīduma tilpums ir benz(c)hrizēna-acetonitrils. Iegūto šķīdumu masas koncentrācija ir 100 μg/cm 3 . Šķīdumus uzglabā aukstā tumšā vietā ne ilgāk kā trīs mēnešus.

5.2.4. Benzo(a)pirēna un benzo(b)krizola darba šķīdumu sagatavošana

Darba šķīdumus sagatavo, atšķaidot standartšķīdumus, izmantojot pipetes ar tilpumu 1, 5 un 10 cm 3 un mērkolbas ar tilpumu 100 cm 3, šķīduma tilpumu noregulē līdz atzīmei ar atbilstošu šķīdinātāju, sajauc un uzglabā. aukstā tumšā vietā ne ilgāk kā vienu mēnesi.

Benzo(a)pirēna šķīduma ar masas koncentrāciju 1,0 μg/cm 3 (nosaka ar spektrofluorimetriju) sagatavošana: no standartšķīduma ņem 1,0 cm 3 un pārnes mērkolbā ar ietilpību 100 cm 3 ; Šķīduma tilpums tika noregulēts līdz atzīmei ar benzolu.

Benz(a)pirēna šķīduma pagatavošana ar masas koncentrāciju 0,25: 1,0 un 5,0 μg/cm 3 (nosaka ar augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfiju): no standartšķīduma ņem 0,25; 1,0; attiecīgi 5,0 cm 3 un pārnes mērkolbās ar ietilpību 100 cm 3 ; šķīdumu tilpums tika noregulēts līdz atzīmei ar acetonitrilu.

Benzo(b)krizēna šķīdumu pagatavošana ar masas koncentrāciju 0,5 un 10 µg/cm 3: no standartšķīduma ņem attiecīgi 0,5 un 10 cm 3 un pārnes mērkolbās ar ietilpību 100 cm 3 ; Katra šķīduma tilpumu uzpilda līdz atzīmei ar acetonitrilu.

5.2.5. Kalibrēšanas šķīdumu sagatavošana

Lai pagatavotu benzopirēna un benzo (b) krizēna maisījuma kalibrēšanas šķīdumus, benzopirēna standartšķīduma tilpumi ar masas koncentrāciju 100 μg/cm 3 un benzo(b) darba šķīduma tilpumi. )Krizēna masas koncentrācija 10 μg/cm 3, tilpumu uzliek līdz atzīmei ar acetonitrilu. Iegūtos šķīdumus sajauc un uzglabā tumšā, aukstā vietā ne ilgāk kā vienu mēnesi.

2. tabula

risinājums Sākotnējā šķīduma tilpums, cm 3 Masas koncentrācija kalibrēšanas šķīdumā, µg/cm 3 Benz (a) pirēna masas koncentrācija 100 μg / cm3 Benz (v) krizēna masas koncentrācija 10 μg / cm3 Benz(a)pirēns Benz(v)krizēns

5.3 Pārbaudes veikšana

5.3.1. benzo(a)pirēna atdalīšana no produkta

Apaļdibena kolbā vai plakandibena kolbā ar ietilpību 100 cm 3 ievieto produkta paraugu, kas sver 10 g, šķīdumu, kas sastāv no 4 g kālija hidroksīda 50 cm 3 92% etilspirtā. pievienots. Kolbas saturu sajauc kratot. Kolbu pievieno atteces dzesinātājam un karsē uz ūdens vannas vai uz magnētiskā maisītāja, reakcijas maisījumam vārot 3 stundas, pēc tam caur ledusskapi pievieno 100 cm 3 destilēta ūdens. Reakcijas masu atdzesē līdz istabas temperatūrai. Pēc atdzesēšanas reakcijas masu pārnes dalāmajā piltuvē ar tilpumu 500 cm 3 . Ja pēc hidrolīzes reakcijas masā paliek ciets atlikums, to atdala uz Buhnera piltuves, nomazgājot atlikumu uz filtra ar 30 cm 3 karsta etilspirta. Ekstrakcijai izmanto reakcijas masas šķidro fāzi. Dalāmpiltuvē pievieno 30 cm 3 n.heksānu. Piltuves saturu sakrata un atstāj, lai atdalītu šķidrumus. Ja veidojas emulsija, maisījumam dalāmajā piltuvē pievieno 20 cm 3 etilspirta. Pēc atdalīšanas apakšējo ūdens-spirta fāzi ielej kolbā, un heksāna ekstraktu ielej citā dalāmajā piltuvē. Šo reakcijas masas apstrādi veic vēl divas reizes, ekstrakcijai izmantojot 30 cm 3 n-heksānu un etilspirtu, lai atdalītu emulsiju 20 cm 3 porcijās.

Pēc ekstrakcijas apvienoto heksāna ekstraktu mazgā dalāmpiltuvē ar destilētu ūdeni trīs reizes pa 30 cm 3, ekstraktu pārnes apaļkolbā ar tilpumu 100 cm 3, filtrējot caur bezūdens slāni. nātrija sulfāts uz piltuves ar porainu filtru. Šķīdumu iztvaicē ar rotācijas iztvaicētāju līdz 50 cm 3 tilpumam ūdens vannas temperatūrā, kas nepārsniedz 60 °C.

Vienu atdalītu ekstraktu pārnes dalāmajā piltuvē ar tilpumu 500 cm 3 un pievieno tai 50 cm 3 dimetilformamīda un ūdens maisījuma tilpuma attiecībā 9:1. Maisījumu 1 minūti enerģiski krata, pēc fāzu atdalīšanas apakšējo ielej plakandibena kolbā ar tilpumu 200 cm 3 un no augšējā heksāna atkal ekstrahē 50 cm 3 dimetilformamīda un ūdens maisījuma. slānis. Heksāna slāni izmet, plakanā kolbā apvienoto dimetilformamīda ekstraktu pārnes uz dalāmo piltuvi, pievieno 100 cm 3 destilēta ūdens un ekstrakciju no ūdens fāzes veic ar heksānu trīs reizes 50 cm 3 . Ūdens fāzi izmet, un heksāna ekstraktu mazgā ar ūdeni trīs reizes 30 cm 3, pārnes plakandibena kolbā, pievieno 10 g bezūdens nātrija sulfāta un inkubē vienu stundu, n.heksānu iztvaicē uz rotācijas iekārtas. iztvaicētāju līdz tilpumam 1,5 - 2,0 cm 3, atlikušo šķīdinātāju noņem

GOST R 51650-2000

gaisa plūsma caur vakuumsūkni, kas savienota ar ūdens strūklas sūkni, kolbā esošo atlikumu izšķīdina 0,5 cm 3 etilspirtā.

Iesver (2,5 ± 0,2) g Sephadex LH-20 glāzē ar tilpumu 100 cm 3, pievieno 20 cm 3 etilspirta un ļauj uzbriest 3-4 stundas.Tad želeju pārnes, mazgājot ar nelielu spirta daudzumu stikla hromatogrāfijas kolonnā, ļauj šķīdinātājam notecēt tā, lai spirta slānis virs sorbenta slāņa paliktu vismaz 2 mm. Atlikušo ekstrakta daļu no kolbas ar pipeti uzliek sagatavotajai kolonnai, trīs reizes izskalojot no kolbas ar etilspirtu pa 0,5 cm 3 porcijām. Eluciju no policiklisko aromātisko ogļūdeņražu kolonnas, ieskaitot benzo(a)pirēnu, veic ar 40 cm 3 etanola, pirmo frakciju ar tilpumu 12 cm 3 izmet, un otro frakciju ar tilpumu 25 cm 3 tiek savākts. Šķīdinātāja eluēšanas ātrumu 0,5 cc/min nodrošina, pieliekot nelielu pārspiedienu ar gaisa vai slāpekļa plūsmu caur sprauslu, kas savienota ar pūtēju vai gāzes balonu. Gāze jāpiegādā caur stikla cauruli, kas piepildīta ar silikagelu.

Kolonnu ar Sephadex LH-20 var izmantot atkārtoti. Lai to izdarītu, neļaujot sorbentam izžūt pēc frakcionēšanas, kolonnu mazgā ar 25 cm 3 etilspirta un uzliek nākamo paraugu.

Otrās frakcijas šķīdumu pārnes bumbierveida kolbā ar ietilpību 50 cm 3, šķīdinātāju iztvaicē līdz tilpumam 0,5 - 1,0 cm 3, tā atlikumus izvada gaisa vai slāpekļa plūsmā.

Iegūto benzo(a)pirēnu saturošo frakciju tālāk analizē ar augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfiju vai spektrofluorimetru metodi.

Tajā pašā laikā tiek veikts kontroles eksperiments, veicot visus analīzes posmus, izmantojot reaģentus saskaņā ar procedūru, bet bez produkta svēršanas.

5.3.2. Benz(a)pirēna noteikšana ar augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfiju

5.3.2.1. Hromatogrāfijas apstākļi

Hromatogrāfijas apstākļus izvēlas atkarībā no izmantotā šķidruma hromatogrāfa un hromatogrāfijas kolonnas veida.

Kā piemēru var sniegt šādus nosacījumus benzo(a)pirēna hromatogrāfiskai noteikšanai.

Šķidruma hromatogrāfs AIex-334 ar dienasgaismas detektoru Kratos FS-970.

Supelcosil LC-PAM kolonna, granulācija 5 mikroni, garums 150 mm, diametrs - 4,6 mm.

Fluorometriskais detektors: ierosmes viļņa garums 300 nm, emisijas filtrs - 418 nm.

Kustīgā fāze: acetonitrils un ūdens tilpuma attiecībā 8:2.

Elucijas ātrums - 2,0 cm 3 /min.

Injicētā parauga tilpums ir 20 µl.

Pastiprinātāja jutība ir izvēlēta tā, lai benzo (a) pirēna un iekšējā standarta - benzo (b) krizēna signālu intensitāte nepārsniegtu 95% no skalas.

Analīzes laiks - 15 min; benzo(a)pirēna aiztures laiks - 5 min, benzo(b)krizēna -13 min.

Analizētos šķīdumus divreiz hromatografē tādos pašos apstākļos. Pīķa laukumus mēra, izmantojot integratoru vai manuāli kā pīķa augstuma un platuma pusaugstuma reizinājumu.

Benzo(a)pirēna satura noteikšanu veic ar iekšējā standarta vai pievienošanas metodi.

5.3.2.2. benzo(a)pirēna satura noteikšana šķīdumā (ekstraktā), kas iegūts saskaņā ar 5.3.1. punktu, izmantojot iekšējā standarta metodi

Izmantojot šo kvantitatīvās novērtēšanas metodi, hromatogrāfu sākotnēji kalibrē, izmantojot kalibrēšanas šķīdumus, kas sagatavoti saskaņā ar 5.2.5.

Saskaņā ar 5.3.2.1. punktā norādītajiem nosacījumiem katram sagatavotajam šķīdumam pieraksta trīs hromatogrammas un izmēra benzo(a)pirēna un benzo(b)krizēna pīķu laukumus. Nosakiet benzo(a)pirēna un benzo(b)krizēna pīķu laukuma vidējo aritmētisko, ko aprēķina pēc trim hromatogrammām.

Kalibrēšanas koeficientu K aprēķina pēc formulas

kur un un 2 ir benzo (a) pirēna (/l]) un benzo (b) krizēna (t 2) masas, μg, kas ievadīts hromatogrāfā; 5) un ^2 - benz(a)pirēna (.9]) un benzo(b)krizēna (A^) pīķu laukumi, cm 3 .

Katram šķīdumam aprēķina kalibrēšanas koeficientu K.

Tās vērtības nedrīkst atšķirties no kalibrēšanas koeficienta vidējā aritmētiskā no visiem rezultātiem vairāk par 10%.

Ar ierosmes viļņa garumu 300 nm un emisijas filtru 418 nm kalibrēšanas koeficienta vērtība ir 9,5.

Pirms analīzes uzsākšanas paraugu sagatavošanas stadijā sārmainai hidrolīzei produkta paraugam un kontroles paraugam pievieno 50 μl benzo(b)krizēna šķīduma ar masas koncentrāciju 0,5 μg/cm 3. Abiem paraugiem veic visas 5.3.1. punktā norādītās pārbaudes darbības. Sauso atlikumu izšķīdina 200 µl acetonitrila.

Saskaņā ar nosacījumiem, kas norādīti 5.3.2.1. punktā, reģistrē benzpirēna šķīduma ar masas koncentrāciju 100 μg/cm 3 un benzo (b) krizola šķīduma ar masas koncentrāciju 100 μg/cm 3 hromatogrammas. , ievērojiet benza (a) pirēna un benza (c) krizenas izdalīšanās laiku. Pēc tam reģistrē kontroles parauga hromatogrammas, kam pievienots benzo(b)krizēns, un produkta paraugam ar tādu pašu benzo(b)krizēna piedevu. Izmēra benzo(a)pirēna un benzo(b)krizēna pīķu laukumus produkta parauga un kontroles parauga hromatogrammās.

Katram paraugam reģistrē divas hromatogrammas. No divām hromatogrammām aprēķina benzo(a)pirēna un benzo(b)krizēna pīķu laukuma vidējo aritmētisko.

Pamatojoties uz iegūtajiem datiem, produkta m\ paraugā un kontroleksperimenta paraugā m 2 nosaka benzo(a)pirēna masu, mcg.

“72 ir benzo(a)pirēna masa kontroles eksperimenta paraugā, mcg; t st ir produkta paraugā un kontroles paraugā ievadītā benzo(v)krizēna masa, mcg;

S"] un S 2 - benzo(a)pirēna pīķu laukumi produkta parauga (.S"]) un kontroles parauga (.S/) hromatogrammās, cm 2 ;

L/, L/ - benz(b)krizēna pīķu laukumi produkta parauga (.SS) un kontroles parauga (L/) hromatogrammās, cm 2 ;

K ir kalibrēšanas koeficients, kas noteikts saskaņā ar 5.3.2.2.

5.3.2.3. benzo(a)pirēna satura noteikšana šķīdumā (ekstraktā), kas iegūts saskaņā ar 5.3.1. punktu ar pievienošanas metodi

Kvantitatīvās noteikšanai, izmantojot pievienošanas metodi, kontroles eksperimenta paraugu analizē vienlaikus ar produkta paraugu. Frakcijas, kas izolētas no produktu paraugiem un kontroles izmēģinājuma saskaņā ar 5.3.1. punktu, izšķīdina 400 µl acetonitrila. Iegūtos šķīdumus sadala divās daļās, mazāku daļu (40 µl) ņem mēģenē vai bumbierveida kolbā.

Reģistrē produkta parauga hromatogrammas, kontroles paraugus un benz(a)pirēna šķīduma hromatogrammu ar masas koncentrāciju 0,25 μg/cm 3 . Ņemiet vērā benzo(a)pirēna izdalīšanās laiku.

Pārējās produkta un kontroles pieredzes parauga daļās (360 μl) pievienojiet 10 - 20 μl benzo(a)pirēna šķīduma masas koncentrācijai 5 μg/cm 3 . Iegūtos šķīdumus atkārtoti ievada hromatogrāfā.

Visas hromatogrammas ieraksta divos eksemplāros. Tiek mērīti benzo(a)pirēna pīķu laukumi. No divām hromatogrammām aprēķina benzo(a)pirēna pīķa laukuma vidējo aritmētisko.

Pamatojoties uz iegūtajiem datiem, produkta paraugā /77] un kontroleksperimenta paraugā t 2 nosaka benzo(a)pirēna masu, μg:

t op ■ S 1 . _ t līdz ■ S 3 (9)

S 2 - 0,95) ' 2 5 4 - 0,95 3'

kur /77 op un /77 k ir benzo(a)pirēna masa, kas pievienota daļai ekstrakta no produkta parauga (t op) un kontroles parauga (/%), μg;

S"] un S 2 - benzo(a)pirēna pīķu laukumi produkta parauga (.S"]) un produkta parauga ar benzo(a)pirēna (L/) hromatogrammās, cm 2;

L/ un.S) - benz(a)pirēna pīķu laukumi kontroleksperimenta parauga (L/) un kontroleksperimenta parauga ar benzo(a)pirēna piedevu (L/) hromatogrammās, cm 2;

0,9 ir parauga proporcija, kurai pievienots benz(a)pirēns.

5.3.3. Benz(a)pirēna satura noteikšana ar spektrofluorimetru istabas temperatūrā

Nosakot benzo(a)pirēna saturu ar spektrofluorimetru, vienlaikus ar produkta paraugu analizē kontroleksperimenta paraugu, kuram pievieno 50 μl benzo(a)pirēna šķīduma ar masas koncentrāciju 1 μg. /cm 3 tiek pievienots.

Frakcijas, kas satur benzo(a)pirēnu, kas iegūtas saskaņā ar 5.3.1. punktu no produkta parauga un kontroles parauga ar piedevu, izšķīdina 0,5 cm 3 benzola un pēc tam pakļauj papildu attīrīšanai plānā acetilētas celulozes slānī.

Lai to izdarītu, 20 x 20 cm plati, kas sagatavota, kā norādīts 5.2.2. punktā, sadala divos laukos: sānu laukā 1,5–2 cm platumā un galvenajā laukā, pāri sorbenta slānim ar skalpeli vai velkot sadalošo joslu. plāna lāpstiņa. Frakcijas šķīdumu, kas izolēts saskaņā ar 5.3.1. punktu, uzklāj uz galvenā lauka ar nepārtrauktu joslu, atkāpjoties 2 cm no plāksnes apakšējās malas un 1 cm no sānu malām. Šķīdumu uzklāj, izmantojot plāni izvilktu kapilāru vai mikrošļirci, plankumu izmērs nedrīkst pārsniegt 5 mm. Vielas kvantitatīvai pārvietošanai to divas reizes nomazgā no kolbas sieniņām ar nelielu daudzumu benzola (0,4–0,6 cm 3). Uz sānu lauka sākuma līnijas punktam tiek uzklāts 5 μl benzo(a)pirēna šķīduma ar masas koncentrāciju 1 μg/cm 3. Pēc pilnīgas šķīdinātāja iztvaicēšanas plāksni ievieto iepriekš piesātinātā hromatogrāfijas kamerā 70° - 85° leņķī un eluēšanu veic etilspirta, acetona un ūdens maisījumā attiecībās 60: 25:15. Kad šķīdinātāja fronte sasniedz 2 cm no plāksnes augšējās malas, to izņem no kameras, žāvē gaisā un benzo(a)pirēna hromatogrāfisko zonu attīsta zem ultravioletā starojuma lampas. Sorbents no benzo(a)pirēna zonas no galvenā lauka tiek nokasīts no plāksnes, izmantojot skalpeli vai plānu lāpstiņu un pārnests uz stikla filtru, no kura viela tiek eluēta vairākos posmos ar 50 cm 3 benzola kolbās. ar ietilpību 100 cm 3, tad šķīdinātāju iztvaicē līdz nelielam tilpumam, pārējo šķīdinātāja daļu noņem ar gaisa plūsmu un pievieno kolbā 1 cm 3 benzola.

Spektrofluorimetrā pie aizraujošas gaismas viļņa garuma 386 nm diapazonā no 400 līdz 440 nm ar skenēšanas ātrumu 60 nm/min produkta parauga un kontroles parauga fluorescences spektri, pievienojot benzo(a)pirēnu. tiek ierakstīti.

Šķīdumu spektri tiek reģistrēti vienā pastiprināšanas režīmā, regulējot spraugu un pastiprinājuma koeficientu atbilstoši kontrolparauga šķīdumam tā, lai benzo(a)pirēna signāls pie 406 nm būtu 0,4 - 0,6 no instrumenta skalas. Katram risinājumam spektru reģistrē divas reizes, panākot labu reproducējamību. Iegūtajās spektrogrammās pie maksimuma pie 406 nm benzo(a)pirēna spektrālās līnijas augstumu produkta paraugam un kontroles paraugam mēra milimetros. Aprēķiniet benzo(a)pirēna augstumu vidējo vērtību pēc divām spektrogrammām. Ja produktā ir augsts benzo(a)pirēna līmenis, paraugus atšķaida ar benzolu un spektru reģistrē vēlreiz tādā pašā pastiprināšanas režīmā kā kontroles paraugam.

Veiciet divas paralēlas noteikšanas.

5.4. Apstrādes rezultāti

5.4.1. Benz (a) pirēna masas daļu produktā X \,% vai X 2, mg / kg, izmantojot augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfijas metodi, aprēķina pēc formulām:

(t 1 - t 2) ■ 100 (t g - t 2) t ■ 1000 1000 "t 10

kur mi ir benzo(a)pirēna masa produkta paraugā, μg;

m2 ir benzo(a)pirēna masa kontroles paraugā, μg; t ir analīzei ņemtā produkta masa, g.

5.4.2. Benz(a)pirēna masas daļu produktā A), % vai X 2 , mg/kg, izmantojot spektrofluorimetrijas metodi, aprēķina pēc formulām:

S st NU- 100 s ST // V t ■ 1000 ■ 1000 ■

kur cst ir benzo(a)pirēna masas koncentrācija darba šķīdumā, kas sagatavots saskaņā ar 5.2.4. punktu un pievienots kontroles paraugam, μg/cm 3 ;

benzo(a)pirēna spektrālās līnijas augstums produkta parauga spektrogrammā, mm; benzo(a)pirēna spektrālās līnijas augstums kontroleksperimenta parauga spektrogrammā, mm;

V ir benz (a) pirēna darba šķīduma tilpums, kas pievienots kontroleksperimenta paraugam, cm 3; t ir testēšanai ņemtā produkta parauga svars, g.

Galīgo testa rezultātu pieņem kā vidējo aritmētisko no divām paralēlām noteikšanām ar vienādu zīmīgo ciparu skaitu.

Ja neatbilstība starp paralēlo noteikšanu rezultātiem nepārsniedz \X-y - YY 2 |<

< 0,01 dX, где, Х 2 и X- результаты параллельных определений и их среднее арифметическое, а d - норматив контроля сходимости, то среднее арифметическое X принимают за результат анализа. В противном случае анализ повторяют. Значение норматива d приведено в таблице 3.

Saskaņā ar analīzes X rezultātu un relatīvās kļūdas d vērtību, kas dota 3. tabulā, aprēķiniet absolūto kļūdu A = 0, (SH

Analīzes rezultātu uzrāda kā (X ± A), mg/kg vai %, ja P = 0,95.

5.5. Analīzes rezultātu precizitātes kontrole

5.5.1. Atkārtotu noteikšanu atkārtojamību pārbauda katram paraugam, kas analizēts saskaņā ar 5.3.

5.5.2. Darba paraugus izmanto, lai kontrolētu reproducējamību. Paraugu sadala divās vienādās daļās un analizē saskaņā ar metodiku dažādās laboratorijās vai vienā laboratorijā, pēc iespējas mainot analīzes apstākļus, ti, izmantojot dažādus tilpuma trauku komplektus, analīzes tiek veiktas dažādās dienās vai pa divām. dažādi analītiķi.

Kontroles analīžu reproducējamība tiek uzskatīta par apmierinošu, ja \ X-y - X 2 \<

< 0,01 DX, где Л), Х 2 и X- результаты анализа одной и той же пробы, полученные в разных лабораториях или при варьирующих условиях в одной лаборатории и их среднее арифметическое значение, D - значение норматива внутреннего оперативного контроля воспроизводимости. Значение норматива D приведено в таблице 3.

Reproducējamības kontroles biežums - vismaz reizi divās nedēļās

3. tabula. Mērījumu diapazons, relatīvās kļūdas raksturlieluma vērtība un relatīvās kļūdas nejaušās komponentes (konverģence un reproducējamība) operatīvās kontroles standarti pie ticamības līmeņa P = 0,95

5.5.3. Lai kontrolētu precizitāti, izmantojiet darba paraugus ar zināmu benzo(a)pirēna piedevu. Paraugu sadala divās vienādās daļās, no kurām pirmo analizē saskaņā ar procedūru, bet otrajā ievada zināmo benzo(a)pirēna piedevu un pēc tam arī analizē saskaņā ar procedūru. Piedevas vērtībai jābūt 50 - 150% no benzapirēna satura analizētajā paraugā.

Kontroles analīžu precizitāte tiek uzskatīta par apmierinošu, ja |L) - X- s \< К, где Л), X и с - результаты контрольных анализов пробы с добавкой бенз(а)пирена, реальной пробы и величина добавки бенз(а)пирена соответственно; К - норматив оперативного контроля точности.

Datorā ievadīts FSUE "STANDARTINFORM".

Iespiests FSUE filiālē "STANDARTINFORM" - tips. "Maskavas printeris", 105062 Maskava, Lyalin per., 6

GOST R 51650-2000

1 izmantošanas joma................................................ ... ......... viens

3 Paraugu ņemšana ................................................... .............................. 2

4 Zemas temperatūras spektrofluorimetrijas metode ................................... 2

4.1 Iekārtas, materiāli un reaģenti................................................ ... 2

4.2 Sagatavošanās pārbaudei................................................ ................................ 3

4.3 Pārbaudes veikšana ................................................... .............. 3

4.4. Rezultātu apstrāde.................................................. .................. 6

4.5 Analīzes rezultātu precizitātes pārbaude................................................................ ..... 6

5 Augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfijas un spektrofluorimetrijas metodes

telpas temperatūra ................................................ ................................ 7

5.1. Iekārtas, materiāli un reaģenti................................................ ... 8

5.2 Sagatavošanās pārbaudei................................................ ................................ 9

5.3 Pārbaudes veikšana ................................................... .............. ....10

5.4. Rezultātu apstrāde................................................ ................ ....trīspadsmit

5.5. Analīzes rezultātu precizitātes pārbaude................................................... ..................14

6 Drošības prasības ................................................... ................ 15

7 Operatora kvalifikācijas prasības................................................ .15

A pielikums Bibliogrāfija

KRIEVIJAS FEDERĀCIJAS VALSTS STANDARTS

PĀRTIKAS PRODUKTI Metodes benzo(a)pirēna masas daļas noteikšanai

Kopējās masas benz(a)pirēna frakcijas noteikšanas metodes

Ievadīšanas datums 2001-07-01

1 izmantošanas joma

Šis starptautiskais standarts attiecas uz pārtikas izejvielām, pārtikas produktiem, pārtikas un garšas piedevām un nosaka metodes benzo(a)pirēna masas daļas noteikšanai, izmantojot spektrofluorimetru zemā un istabas temperatūrā un augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfiju.

2. precizitātes klases vispārējas nozīmes laboratorijas svari ar augstāko svēršanas robežu 500 g saskaņā ar GOST 24104.

Rotācijas iztvaicētājs IR-1M.

Vannas ūdens.

Mājsaimniecības elektriskā plīts ar slēgtu spirāli un apkures regulatoru saskaņā ar GOST 14919.

Djūāra trauks jebkuras tilpuma šķidrajam slāpeklim

Vannas hromatogrāfijai (emaljētas fotokivetes).

Stikla plāksnes ar izmēriem 15 x 30 un 20 x 40 cm.

Kolbas K-1-250-29/32 THS, K-1-100-29/32 THS, K-1-500-29/32 THS vai P-1-500-29/32 THS saskaņā ar GOST 25336.

Ledusskapji KHIT-1-300-14/23 XC vai KHIT-1-400-14/23 XC saskaņā ar GOST 25336.

Ledusskapji KhPT-2-400-29/32 KhS un KhPT-1-300-29/32 vai KhPT-400-29/32 KhS saskaņā ar GOST 25336.

Deflegmators 250-19/26-29/32 TS vai deflegmators 300-19/26-29/32 TS saskaņā ar GOST 25336.

Stikla mēģenes P2-10-180 XC saskaņā ar GOST 25336.

Sprausla P-1-19 / 26-14 / 23 TC vai H2-19 / 23 saskaņā ar GOST 25336.

Ūdens strūklas laboratorijas sūknis saskaņā ar GOST 25336.

Pipetes ar ietilpību 1, 2, 5, 10 cm 3 saskaņā ar GOST 29228 un GOST 29229.

Piltuve VFO-32-POR 100-14/23 XC vai VFO-32-POR 160-14/23 XC saskaņā ar GOST 25336.

Izmērītas mēģenes P-2-15-14/23 XC saskaņā ar GOST 1770.

Atdalošā piltuve VD-1-500 vai VD-3-500 saskaņā ar GOST 25336.

Izmēru cilindri 1-100, 1-250 vai 3-100, 3-250 saskaņā ar GOST 25336.

Krūzes svēršanai (pudeļu maisi) SV-14/8, vai SV-19/9, vai SV-24/10, vai SV-34/12 saskaņā ar GOST 25336.

Termometrs ar temperatūras mērīšanas robežām 0-250 °С ar dalījuma vērtību 1 °С saskaņā ar GOST 29224.

Stikla kapilāri, stikla stieņi.

n.oktānskaitlis, h., saskaņā ar normatīvo dokumentu.

n.heksāns, h., saskaņā ar normatīvo dokumentu.

Rektificēts tehniskais etilspirts saskaņā ar GOST 18300 vai rektificēts etilspirts saskaņā ar GOST R 51652.

Naftas ētera frakcija 40 - 70 ° C saskaņā ar normatīvo dokumentu.

Alumīnija oksīds 2. aktivitātes pakāpes hromatogrāfijai saskaņā ar normatīvo dokumentu.

Benz (a) pirēns, galvenās vielas saturs nav mazāks par 98%.

1,12-benzperilēns, galvenās vielas saturs nav mazāks par 98%.

Atļauts izmantot citus mērinstrumentus ar metroloģiskajiem raksturlielumiem un iekārtas ar tehniskajiem parametriem, kā arī reaģentus un materiālus, kuru kvalitāte nav zemāka par norādīto.

4.2. Sagatavošanās pārbaudei

4.2.1. Šķīdinātāju attīrīšana

Šķīdinātājus (n. oktānskaitli, etilspirtu, petrolēteri, hloroformu un n. heksānu) destilē parastajā veidā ar atteces dzesinātāju.

4.2.2. Alumīnija oksīda sagatavošana

Alumīnija oksīdu žāvē cepeškrāsnī (250 + 4) ° C temperatūrā 4 stundas un uzglabā traukā ar slīpētu aizbāzni.

4.2.3. Benz(a)pirēna šķīduma sagatavošana plānslāņa hromatogrāfijai (liecinieka šķīdums).

Sverglāzē iesver apmēram 10 mg benzo(a)pirēna, pievieno dažus mililitrus petrolētera, līdz paraugs ir pilnībā izšķīdis.

Iegūto šķīdumu kvantitatīvi pārnes mērkolbā ar ietilpību 100 cm 3 un šķīduma tilpumu noregulē līdz atzīmei ar petrolēteri. Šķīduma glabāšanas laiks ledusskapī nepārsniedz trīs mēnešus.

4.2.4. Benz(a)pirēna standartšķīduma sagatavošana

Sverglāzē iesver (10,0 ± 0,2) mg benzo(a)pirēna, pievieno dažus mililitrus n.oktāna, līdz paraugs ir pilnībā izšķīdis. Iegūtais šķīdums tika kvantitatīvi pārnests mērkolbā ar slīpētu aizbāzni ar ietilpību 100 cm 3 un ievadīts līdz atzīmei ar n.oktānskaitli. Benzo(a)pirēna masas koncentrācija iegūtajā šķīdumā ir 100 µg/cm 3 . Šķīdumu uzglabā ledusskapī. Šķīduma glabāšanas laiks nav ilgāks par trim mēnešiem.

4.2.5. Benzo(a)pirēna darba šķīdumu sagatavošana

Darba šķīdumi ar benzo(a)pirēna masas koncentrāciju 0,1; 0,04 un 0,02 µg/cm 3 n.oktānskaitlī sagatavo, secīgi atšķaidot sākotnējo benzo(a)pirēna standartšķīdumu, kas sagatavots saskaņā ar 4.2.4. punktu, mērkolbās ar slīpētu aizbāzni ar ietilpību 100 cm 3 . Šķīdumus uzglabā ledusskapī. Šķīdumu glabāšanas laiks nav ilgāks par vienu mēnesi.

4.2.6. 1,12-benzperilēna standartšķīduma (iekšējais standarts) sagatavošana

Lai pagatavotu sākotnējo šķīdumu, pudelē iesver (10,0 + 0,2) mg 1,12-benzperilēna, pievieno dažus mililitrus n.oktāna, līdz paraugs ir pilnībā izšķīdis. Iegūtais šķīdums tika kvantitatīvi pārnests mērkolbā ar slīpētu aizbāzni ar ietilpību 100 cm 3 un ievadīts līdz atzīmei ar n.oktānskaitli. 1,12-benzperilēna masas koncentrācija iegūtajā šķīdumā ir 100 µg/cm 3 . Šķīdumu uzglabā ledusskapī. Šķīduma glabāšanas laiks nav ilgāks par trim mēnešiem.

4.2.7. 1,12-benzperilēna darba šķīdumu sagatavošana (iekšējie standartšķīdumi)

Darba šķīdumi ar 1,12-benzperilēna masas koncentrāciju 0,01; 0,005; 0,002 un 0,001 μg/cm3

sagatavots n.oktānskaitlī, secīgi atšķaidot sākotnējo standartšķīdumu, kas sagatavots saskaņā ar 4.2.6. punktu, mērkolbās ar slīpētu aizbāzni ar ietilpību 100 cm 3. Šķīdumus uzglabā ledusskapī. Šķīdumu glabāšanas laiks nav ilgāks par vienu mēnesi.

4.3 Pārbaudes veikšana

4.3.1. benzo(a)pirēna atdalīšana no produkta

Apaļdibena kolbā ar ietilpību 500 cm 3 ievieto produkta paraugu, kas sver 25 g, pievieno kolbā 20 cm 3 destilēta ūdens, 200 cm 3 etilspirta un 20 g kālija hidroksīda.

Kolbas saturu sajauc kratot. Kolbu pievieno atteces dzesinātājam un karsē uz ūdens vannas, reakcijas maisījumam vārot 3 stundas, pēc tam caur dzesētāju pievieno 150 cm 3 ūdens; kolbu izņem no vannas un atdzesē līdz istabas temperatūrai.

Pēc atdzesēšanas reakcijas maisījuma šķidro fāzi dekantējot pārnes uz dalāmo piltuvi, pārējo produktu atstājot kolbā. Kolbā ar atlikumu pievieno 150 cm3 n-heksāna, kolbas saturu enerģiski maisa un n-heksānu dekantē dalāmpiltuvē.

Piltuvi aizver un enerģiski sakrata, pēc tam nostiprina statīvā un atstāj, lai atdalītu šķidrumus. Lai atdalītu iegūto emulsiju, maisījumam dalāmajā piltuvē pievieno 20 cm 3 etilspirta. Pēc atdalīšanas apakšējo ūdens-spirta fāzi ielej atpakaļ kolbā ar nogulsnēm, un heksāna ekstraktu ielej 500 cm 3 kolbā.

Šo reakcijas maisījuma apstrādi veic vēl divas reizes, izmantojot 100 cm 3 n-heksāna ekstrakcijai un etilspirtu emulsijas atdalīšanai, 20 cm 3 porcijās.

Ekstrakcijas beigās atlikumu kolbā un hidrolizātu izmet, ekstraktu mazgā dalāmpiltuvē ar destilētu ūdeni trīs reizes pa 50 cm 3 un pa daļām iztvaicē apaļkolbā ar ietilpību: 250 cm 3 iepriekš nosver līdz otrajai zīmei aiz komata ar rotācijas iztvaicētāju ūdens vannas temperatūrā, kas nav augstāka par 60 °С. Kolbu ar ekstraktu atstāj velkmes pārsegā, lai noņemtu šķīdinātāja pēdas, un pēc tam to vēlreiz nosver. Ekstrahētā ekstrakta svaru nosaka pēc svēršanas starpības.

No ekstrakta kolbā 1/5 daļu ņem pudelē bez svēršanas. Kolbu ar atlikušo ekstrakta daļu nosver. Pudelei ar daļu ekstrakta pievieno 0,1-0,2 cm 3 benz(a)pirēna "liecinieka" šķīduma, kas sagatavots saskaņā ar 4.2.3. Pudeles saturu un atlikumu kolbā izšķīdina nelielā daudzumā petrolētera.

Ekstrakta hromatogrāfiskai atdalīšanai alumīnija oksīdu vienmērīgi ielej uz stikla plāksnes, kuras izmēri ir 20x40 cm. Pēc tam, izmantojot stikla stieni, kas sadalīts trīs daļās (14, 1 un 3 cm) ar 1 mm bieziem un 3 mm platiem gumijas gredzeniem, alumīnija oksīds tiek rūpīgi izlīdzināts.

Iegūtos šķīdumus kvantitatīvi uzklāj uz sagatavotās plāksnes ar stikla kapilāriem: šaurajā daļā - šķīdums no pudeles ("liecinieks"), plašajā - produkta ekstrakts no kolbas. Šķīdumus uzklāj vienmērīgi nepārtrauktā sloksnē, atkāpjoties no plāksnes apakšējās malas 7-8 cm.

Plāksni ievieto hromatogrāfijas vannā nelielā 20° - 25° leņķī, ielej petrolēteri tā, lai tas nesasniedz parauga uzlikšanas līniju. Vannu pārklāj ar stiklu, un tiek veikta hromatogrāfija, nogādājot šķīdinātāja priekšpusi līdz plāksnes augšējai malai.

Plāksni neizžāvējot, to apstaro ar ultravioleto gaismu un benzo(a)pirēna atrašanās vietu testa paraugā nosaka gaismas "liecinieka" josla. Testējamā parauga hromatogrammā atzīmē benzo(a)pirēna joslas robežas. Plāksni žāvē gaisā dūmu pārsegā.

Alumīnija oksīda sloksni, kas atzīmēta uz testa parauga hromatogrammas, noņem no plāksnes, izmantojot stikla priekšmetstikliņu, un kvantitatīvi pārnes uz filtra piltuves poraino plāksni. Piltuve ir savienota ar apaļkolbu ar ietilpību 100 cm 3 un benzo(a)pirēnu eluē no alumīnija oksīda ar 50 cm 3 benzola, nelielās porcijās pievienojot benzolu un maisot alumīnija oksīdu uz piltuves ar kociņu. Benzolu iztvaicē līdz sausumam ar rotācijas iztvaicētāju ūdens vannas temperatūrā, kas nepārsniedz 60 °C. Atlikums kolbā tika kvantitatīvi pārnests ar oktānskaitli mēģenē. Šķīduma tilpums mēģenē nedrīkst pārsniegt 5 cm 3 .

Dažu produktu analīzē nenotiek pilnīga un skaidra parauga fluorescējošo komponentu atdalīšanās no produkta izolētā ekstrakta primārās hromatogrāfijas laikā. Šajā gadījumā uz plāksnes “liecinieka” līmenī ir izolēta platāka alumīnija oksīda sloksne; benz(a)pirēnu eluē no alumīnija oksīda ar benzolu, kā aprakstīts iepriekš, un iztvaicēšanas atlikumu izšķīdina etanolā un iegūto spirta ekstraktu atkārtoti hromatografē.

Spirta ekstrakta hromatogrāfiskai atdalīšanai izmanto plāksni ar izmēru 15 x 30 cm ar 0,3 mm biezu alumīnija oksīda slāni. Uz plāksnes ir atdalītas divas 10 un 3 cm platas sloksnes, uz plāksnes platās daļas, izmantojot stikla kapilāru, tiek uzklāts analizējamā produkta spirta ekstrakts un benz (a) pirēna šķīdums petrolēterī (“liecinieks”). Šķīdums) tiek uzklāts uz plāksnes šaurās daļas. Plāksni ievieto vannā 20 - 25° leņķī un veic hromatogrāfiju hloroformā, nogādājot šķīdinātāja priekšpusi līdz plāksnes augšējai malai. Ultravioletā gaismā "liecinieks" atzīmē pētāmā produkta alumīnija oksīda joslu ar benzo (a) pirēnu. Pēc tam benzo(a)pirēnu eluē no alumīnija oksīda ar benzolu un visas turpmākās darbības veic, kā aprakstīts iepriekš.

GOST R 51650-2000

Mēģenē pārnes benzo(a)pirēna šķīdumu n.oktānā. Šķīduma tilpums nedrīkst pārsniegt 5 cm 3, ja produkta sākotnējais paraugs ir 25 g.

Iegūtajā šķīdumā (ekstraktā) benzo(a)pirēna saturu nosaka ar zemas temperatūras spektrofluorimetrijas metodi, kvantitatīvā novērtējuma veikšanai izmantojot pievienošanas metodi vai iekšējā standarta metodi.

4.3.2. Benzo(a)pirēna satura noteikšana šķīdumā (ekstraktā), kas iegūts saskaņā ar 4.3.1. punktu, ar pievienošanas metodi.

Trīs mēģenēs ar pipeti ielej 1 cm 3 iegūtā benzo(a)pirēna šķīduma n.oktānā. Pēc tam pirmajā mēģenē ielej 2 cm 3 n.oktānskaitli. Otrajā mēģenē ielej 1,5 cm 3 n.oktāna un 0,5 cm 3 benz(a)pirēna darba šķīduma, masas koncentrācija 0,1 µg/cm 3, kas sagatavoti saskaņā ar 4.2.5. Trešajā mēģenē pievieno 1 cm 3 n.oktānskaitli un 1 cm 3 tāda paša benzo(a)pirēna darba šķīduma kā otrajā mēģenē.

Spektrofluorimetriskā analīze sākas ar trešo mēģeni. Lai to izdarītu, trešo mēģeni ievieto Djūāra traukā ar šķidro slāpekli spektrofotometra ieejas spraugas priekšā; iestatiet benzo(a)pirēna analītiskās fluorescences līniju 403 nm pie aizraujošas gaismas viļņa garuma 367 nm. Regulējot pastiprinājumu un atverot spraugu, kā arī vienlaikus regulējot mēģeni Djūāra traukā, maksimālais signāls tiek sasniegts ar spektrofotometra reģistrēšanas ierīci (līdz 50 - 80%), pēc kura tiek iegūta benza spektrogramma ( a) pirēns tiek reģistrēts 401 - 404 nm apgabalā, fiksējot reģistrēšanas ierīces spektrofotometra vērtību pie viļņa garuma 401 nm. Spektra ierakstīšana tiek atkārtota divas reizes.

Pēc tam otro un pirmo mēģeni secīgi sasaldē šķidrā slāpeklī un fluorescences spektrus reģistrē viļņu garuma diapazonā no 401 līdz 404 nm, noteikti iestatiet ierakstītāja pildspalvu pie viļņa garuma 401 nm tādā pašā pozīcijā kā skenējot paraugu. trešajā mēģenē.

Benzo(a)pirēna masas koncentrāciju analizētajā ekstraktā nosaka pēc grafika, kurā pa abscisu asi ir attēlota benzo(a)pirēna pievienošanas vērtība (µg) un smailes pīķa augstums. benzo(a)pirēna maksimālā raksturīgā līnija pie 403 nm uzzīmēta pa ordinātu asi, ko mēra no iegūtajām spektrogrammām milimetros.

Ja benzo(a)pirēna masas koncentrācija testa šķīdumā ietilpst mērījumiem piemērotā apgabalā, tad iegūtie eksperimenta punkti atrodas uz vienas taisnes. Ekstrapolējot šo taisni uz krustpunktu ar abscisu asi, uz tās tiek iegūts segments, kas atbilst benzo (a) pirēna saturam šķīdumā bez piedevas, t.i., 1 cm 3 testa šķīduma. Ja benzo(a)pirēna masas koncentrācija analizētajā šķīdumā ir lielāka par ierīces mērītās koncentrācijas diapazona augšējo robežu, tad analizējamo šķīdumu atšķaida ar n.oktānskaitli.

4.3.3. benzo(a)pirēna satura noteikšana šķīdumā (ekstraktā), kas iegūts saskaņā ar 4.3.1. punktu, izmantojot iekšējā standarta metodi

1,12-benzperilēnu izmanto kā iekšējo standartu. Ielejiet mēģenē 3 cm 3 benz(a)pirēna šķīduma n.oktānskaitlī, kas iegūts saskaņā ar 4.3.1. punktu, un ievietojiet to Djūāra traukā ar šķidro slāpekli spektrofotometra ieejas spraugas priekšā, iestatiet analītisko vērtību. līniju pie 403 nm pie aizraujošas gaismas viļņa garuma 367 nm un veic šķīduma spektra reģistrēšanu viļņu garuma diapazonā no 401 līdz 409 nm. No līnijas intensitātes (atbilstoši benzo(a)pirēna raksturīgās līnijas maksimuma pīķa augstumam pie 403 nm) tiek novērtēts aptuvenais benzo(a)pirēna saturs paraugā. Saskaņā ar šo novērtējumu mēģenē pievieno 1,12-benzperilēna šķīdumu ar 3 cm 3 benz(a)pirēna šķīduma n.oktānā tādā daudzumā, lai intensitāte būtu 1,12- benzperilēns parauga spektrā plkst

406,3 nm bija 3–5 reizes lielāks par benz (a) pirēna līnijas intensitāti pie viļņa garuma 403 nm.

Spektrs tiek reģistrēts viļņu garuma diapazonā no 401 līdz 409 nm divas reizes.

Benz(a)pirēna raksturīgo līniju intensitāte pie 403 nm un 1,12-benzperilēna pie

406,3 nm (attiecīgi H| un H 2) nosaka pēc spektrogrammām, mērot pīķu augstumus pie šo savienojumu raksturīgo līniju maksimumiem milimetros. Aprēķinos ņem vidējo vērtību. Aprēķināts benz (a) pirēna (EGD) līnijas intensitātes koeficients (K) pret 1,12-benzperilēna (EG 2) līnijas intensitāti, K = //]/// 2.

Tālāk šo koeficientu nosaka benzo(a)pirēna standartšķīdumiem (X st). Lai to izdarītu, divās mēģenēs ielej 3 cm 3 benz (a) pirēna standartšķīdumus ar masas koncentrāciju 0,02 un 0,04 μg/cm 3. Katrā mēģenē ielej tādu pašu 1,12-benzperilēna daudzumu kā mēģenē ar paraugu. Katra šķīduma spektri tiek reģistrēti divas reizes viļņu garuma diapazonā 401 - 409 nm.

Tajā pašā laikā ir jānodrošina, lai ierakstītāja pildspalvas pozīcija pie viļņa garuma 401 nm visos gadījumos būtu fiksēta vienā līmenī.

Pēc tam no spektrogrammām nosaka benz(a)pirēna raksturīgo līniju intensitāti pie 403 nm un 1,12-benzperilēna pie 406,3 nm (attiecīgi W un H 2). Aprēķinos ņem vidējo vērtību. Aprēķiniet K st \u003d H ^ H 2 katrai benzo (a) pirēna koncentrācijai.

Benzo(a)pirēna masas koncentrāciju analizētajā šķīdumā c, µg/cm 3 aprēķina pēc formulas:

s st *K/K st, (1)

kur c st ir benzo(a)pirēna koncentrācija standartšķīdumā, µg/cm 3 ;

K ir koeficients, kas iegūts no analizētā šķīduma spektrogrammas, pievienojot 1,12-benzperilēnu;

K C1 - koeficients, kas iegūts no benz(a)pirēna standartšķīduma, pievienojot 1,12-benzperilēnu, spektrogrammām, kura vērtība pēc vērtības ir tuvāka analizējamā šķīduma koeficientam ar atbilstošu pievienošanu 1, 12-benzperilēns.

Tiek veiktas divas paralēlas noteikšanas un vienlaikus kontroles eksperiments, ko veic visos analīzes posmos, izmantojot visus reaģentus saskaņā ar procedūru, bet bez produkta parauga.

4.4. Apstrādes rezultāti

Benz (a) pirēna masas daļu L),%, X un X 2, mg / kg aprēķina pēc formulām:

= (s - er) ■m l V ■ 100 = (s - er) ■ t 1 ■ V (2)

3 t 2 ■ t ■ 1000 ■ 1000 t 2 ■ t

_ (s - s 0) ■ V ■ t 1 (3)

kur c ir benzo(a)pirēna koncentrācija, kas noteikta saskaņā ar 4.3.2. vai 4.3.3. punktu analizētā produkta šķīdumā (ekstraktā), kas iegūts saskaņā ar 4.3.1. punktu, µg/cm 3 ; c 0 ir benzo(a)pirēna koncentrācija kontroles eksperimenta šķīdumā, kas iegūts saskaņā ar 4.3.1. punktu, µg/cm 3 ; V ir no analizētā produkta parauga izdalītā benzo(a)pirēna šķīduma tilpums, cm 3;

/«I - no analizētā produkta izdalītā ekstrakta svars, g; m 2 - ekstrakta masa, kas uzklāta uz platas plāksnes sloksnes, g; t ir izstrādājuma parauga masa, g.

Rezultāts ir noapaļots līdz otrajam nozīmīgajam skaitlim.

Noteikšanas gala rezultātam ņem vidējo aritmētisko no divām paralēlām noteikšanām ar vienādu zīmīgo ciparu skaitu.

Ja neatbilstība starp paralēlo noteikšanu rezultātiem nepārsniedz |A) - X 2 \<

< 0,01яЖ, где Xi, Х 2 и X- результаты первого и второго параллельных определений и их среднеарифметическое, a d- норматив контроля сходимости, то среднеарифметическое X принимают за результат анализа. В противном случае анализ повторяют. Значение норматива контроля сходимости d приведено в таблице 1.

Pamatojoties uz analīzes X rezultātu un relatīvās kļūdas d vērtību, kas dota 1. tabulā, tiek aprēķināta absolūtā kļūda A = 0, (SD mg/kg vai %).

Analīzes rezultātu uzrāda kā (X ± A), mg/kg vai %, ja P = 0,95.

4.5. Analīzes rezultātu precizitātes kontrole

Analīzes rezultātu kvalitātes iekšējā operatīvā kontrole (IQA) ietver analīzes rezultātu konverģences, reproducējamības un precizitātes kontroli.

4.5.1. Atkārtotu noteikšanu atkārtojamību pārbauda katram paraugam, kas analizēts saskaņā ar 4.4.

4.5.2. Iekšējai reproducējamības kontrolei izmanto darba paraugus. Paraugu sadala divās vienādās daļās un analizē saskaņā ar metodiku dažādās laboratorijās vai vienā laboratorijā, pēc iespējas mainot analīzes apstākļus, proti, izmantojot dažādus tilpuma trauku komplektus, analīzes tiek veiktas dažādās dienās vai vienā un tajā pašā laboratorijā. divi dažādi analītiķi.

Kontroles analīžu reproducējamība tiek uzskatīta par apmierinošu, ja \X^ - X 2 \<

< 0,01 DX, где X/, Х 2 и X- результаты анализа одной и той же пробы, полученные в разных лабораториях или при варьирующих условиях в одной лаборатории и их среднеарифметическое значение, D - значение норматива внутреннего оперативного контроля воспроизводимости. Значение норматива D приведено в таблице 1.

GOST R 51650-2000

Reproducējamības kontroles biežums ir vismaz reizi divās nedēļās.

1. tabula. Mērījumu diapazons, relatīvās kļūdas raksturlieluma vērtība un relatīvās kļūdas nejaušās komponentes (konverģence un reproducējamība) operatīvās kontroles standarti pie ticamības līmeņa Р = 0,95

4.5.3. Lai kontrolētu precizitāti, izmantojiet darba paraugus ar zināmu benzo(a)pirēna piedevu. Paraugu sadala divās vienādās daļās, no kurām vienu analizē saskaņā ar procedūru; otrajā ievada zināmu benzo(a)pirēna piedevu un pēc tam arī analizē saskaņā ar procedūru. Piedevas vērtībai jābūt 50 - 150% no benzapirēna satura analizētajā paraugā.

Kontroles analīžu precizitāte tiek uzskatīta par apmierinošu, ja \Xy-X-c\< 0,01 К, где Ху, Xи с - результаты контрольных анализов пробы с добавкой бенз(а)пирена, реальной пробы и величина добавки бенз(а)пирена, соответственно; К- норматив оперативного контроля точности. Норматив оперативного контроля точности рассчитывают по формулам: при проведении внутрилабораторного контроля (Р = 0,90)

K \u003d 0,84 V (A X]) 2 + (A x) 2; (4)

ārējās kontroles laikā (P = 0,95)

K \u003d V (A ^) 2 + (A z) 2, (5)

kur A^ + A x ir kļūdas raksturlieluma vērtības, kas atbilst masas koncentrācijai

benzo(a)pirēns paraugā ar piedevu un reālajā paraugā;

Ay, \u003d 0,01 Xy un A x \u003d 0,01d x X, kur Xy un X ir benzo (a) pirēna masas daļa paraugā, pievienojot

un reālā paraugā % vai mg/kg.

Relatīvās kļūdas d x (8y) vērtība ir norādīta 1. tabulā.

Analīzes precizitātes kontrole tiek veikta vismaz reizi mēnesī, kā arī mainot reaģentus vai pēc ilgāka darba pārtraukuma.

Ja tiek pārsniegti precizitātes darbības kontroles standarti, tiek veiktas atkārtotas analīzes. Ja noteiktās normas tiek pārsniegtas atkārtoti, analīžu veikšana tiek apturēta, tiek noskaidroti iemesli, kādēļ iegūti neapmierinoši rezultāti, un tie tiek novērsti.

WQA rezultāti tiek ierakstīti īpašā žurnālā.

5 Augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfijas un spektrofluorimetrijas metodes istabas temperatūrā

Metodes būtība ir ogļūdeņražu, tostarp benzo(a)pirēna, ekstrakcija ar heksānu no produkta, kas iepriekš apstrādāts ar kālija hidroksīda spirta šķīdumu, policiklisko aromātisko ogļūdeņražu frakcijas izolēšana, kas satur benzo(a)pirēnu, un iegūtās frakcijas attīrīšana no traucējošiem piemaisījumiem Sephadex kolonnā un plānā acetilētas celulozes slānī, kam seko izolētā benzo(a)pirēna kvantitatīva noteikšana ar augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfiju vai spektrofluorimetru istabas temperatūrā.

Noteikto benzo(a)pirēna masas daļas vērtību diapazons analizētajos produktos, izmantojot augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfijas metodi un spektrofluorimetrijas metodi istabas temperatūrā, ir 0,0001-0,002 mg/kg jeb 0,1 x 10 -7 - 2,0 x 10 -7% . Optimālais noteikto benzo(a)pirēna masas koncentrāciju diapazons šķīdumā, izmantojot augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfijas metodi, ir 0,01-0,02 μg/cm 3, izmantojot spektrofluorimetrijas metodi - 0,02-0,2 μg/cm 3 .

Benzopirēns pieder pie policiklisko aromātisko ogļūdeņražu klases – PAO. Šī ir organisko savienojumu grupa, kuras ķīmiskajā struktūrā ir benzola gredzeni - trīs vai vairāk gredzenu grupas. Benzapirēna ķīmiskā definīcija: organiska viela, kas satur oglekli, kas ir daļa no policiklisko ogļūdeņražu grupas, ar molāro masu 252,31 g / mol.

Kas ir benzapirēns

Benzopirēns, tāpat kā visi PAO, galvenokārt ir tehnoloģiskā progresa rezultāts, cilvēka darbības sekas. Galvenie PAO tehnogēnā piesārņojuma avoti ir cieto un šķidro organisko vielu, tostarp naftas un naftas produktu, koksnes un antropogēno atkritumu sadedzināšana. No dabiskajiem benzapirēna avotiem ir vērts atzīmēt mežu ugunsgrēkus, vulkānu izvirdumus.

Taču benzapirēna veidošanās var notikt arī bez degšanas procesiem – pirolīzes, gruzdēšanas, polimerizācijas laikā.

Smēķēšanas laikā izdalās benzapirēns: vienas cigaretes dūmos benzapirēna saturs vidēji ir 0,025 mkg, kas ir daudzkārt lielāks nekā MPC (vidēji 10 000-15 000 reižu). Ir aprēķināts, ka vienas cigaretes izsmēķēšana pēc benzapirēna satura ir līdzvērtīga sešpadsmit stundu ilgam izplūdes gāzu ieelpošanai.

Benzpirēna formula

Ir divi benzapirēna izomēri. Pirmais ir 1,2-benzapirēns (3,4-benzpirēns) - atrodas visos sadegšanas produktos - eļļā, darvā, oglās, dažādas izcelsmes dūmos, t.sk. Tīrā veidā tie ir adatas formas kristāli vai gaiši dzeltenas krāsas plāksnes, kuru kušanas temperatūra ir aptuveni 177 ° C.

4,5-Benzopirēns - kristāli adatu un plākšņu veidā gaiši dzeltenā krāsā, ar kušanas temperatūru 179 ° C. Satur akmeņogļu darvā, atrodama augsnēs (īpaši pie uzņēmumiem un lielceļiem). Tam nav mutagēnas vai kancerogēnas īpašības.

Benzopirēnu ķīmiskā formula ir C20H12.

Benzopirēns augsnē un gaisā

Benzopirēns praktiski nenotiek brīvā stāvoklī, bet vienmēr izgulsnējas uz gaisā esošām daļiņām. Kopā ar kustīgām gaisa masām benzapirēns izplatās plašā teritorijā un, izkrītot no gaisa kopā ar cietajām daļiņām (piemēram, nokrišņu laikā), nonāk augsnes slāņos, rezervuāros un uz ēku virsmām.

Benzapirēna migrācijā un akumulācijā savu lomu spēlē arī tāds avots kā autotransports. No vienas puses, pārvietojoties lielos attālumos, automašīnas veicina vienmērīgu benzapirēna izplatību. No otras puses, nosēdinātais benzapirēns lielos daudzumos uzkrājas gar automaģistrālēm un uz tām blakus esošajiem objektiem (tā sauktie "sekundārie avoti").

Benzopirēns ir viegli “iekļauts” vielu apritē dabā: ar nokrišņiem, kuros vienmēr ir cietas daļiņas, tas tiek nogādāts pat uz teritorijām, kas atrodas attālāk no galvenā PAO avota, nonāk ūdenstilpēs, no kurienes iztvaikošanas procesu laikā paceļas augšā. atkal gaisā. Tieši šī spēja migrēt benzapirēns noved pie tā, ka tā saturs var būt augsts vietās, kur nav spēcīga šīs vielas avota.

Nokļūstot vidē un tajā uzkrājoties, benzapirēns iekļūst augos, kas vēlāk kalpo kā lopbarība vai tiek izmantoti cilvēku uzturā. Benzapirēna koncentrācija augos ir augstāka nekā tā saturs augsnē, un pārtikā (vai barībā) ir augstāka nekā to ražošanas izejvielās. Šo ķīmisko vielu, tostarp benzapirēna, koncentrācijas palielināšanas efektu sauc par bioakumulāciju.

Tādējādi benzapirēns ir bīstams ne tikai kā fona vides piesārņojums, bet arī kā viela, kas caur barības ķēdi iekļūst organismā.

Benzapirēna MAC

Galvenā metode benzapirēna noteikšanai un kontrolei ir šķidruma hromatogrāfija.

Saskaņā ar higiēnas standartiem 2.1.6.695-98 un 2.1.6.1338-03 maksimāli pieļaujamais vidējais diennakts benzapirēna daudzums gaisā (MACd) ir 0,1 µg/100 m3 vai 10-9 g/m3, un tā MAC augsnē. saskaņā ar higiēnas standartiem 2.1.7.2041-06 - 0,02 mg / kg kopā, ņemot vērā fona līmeni. Gaisā darba vietās vidējā maiņas MPC nav lielāka par 0,00015 mg / m3. (no 1. un 2. punkta GN 2.2.5. 1313-03).

Benzapirēna MPC ūdenī ir ne vairāk kā 0,000001 mg/l, dzeramajā ūdenī ar centralizētu ūdens apgādes sistēmu - ne vairāk kā 0,000005 mg/l. Pudeļu dzeramajā ūdenī - no ne vairāk kā 0,001 µg/l (augstākās kvalitātes ūdens) līdz ne vairāk kā 0,005 µg/l pirmās kvalitātes kategorijas ūdenī pudelēs.

Pārtikas produktos, kuros tehnoloģisko īpašību dēļ ir pieļaujama benzapirēna klātbūtne, pieļaujamais benzapirēna līmenis ir ne vairāk kā 0,001 mg/kg. Tie ietver: desas un produktus, kuros izmantoti blakusprodukti, tostarp kūpināti; kūpināts speķis; desas un kūpinājumi no mājputnu gaļas un subproduktiem; kūpināti konservi un zivju konservi, kūpinātas zivis; pārtikas graudi.

Lietojot kūpināšanas aromatizētājus, benzapirēna saturs nepārsniedz 2 µg/kg (l), un pēc to lietošanas benzapirēna saturs gatavajos produktos nedrīkst pārsniegt 0,03 µg/kg (l).

Citos pārtikas produktos benzapirēna klātbūtne nav pieļaujama.

Taču saskaņā ar monitoringa rezultātiem benzapirēna satura normas tiek pārsniegtas daudzkārt. Vidēji pilsētās gaisa piesārņojuma līmenis ir 5-12 reizes augstāks nekā MPC, augsnē - 3-7 reizes, pārtikā - no 1,5 līdz 11 reizēm.

Benzapirēna ietekme uz cilvēka ķermeni

Benzopirēns ir klasificēts kā pirmās bīstamības klases viela. Pirmā bīstamības klase ir vielas ar ārkārtīgi augstu bīstamības ietekmi uz vidi, savukārt to izraisītās izmaiņas ir neatgriezeniskas un nav atjaunojamas.

Benzopirēns ir viens no spēcīgākajiem, taču plaši izplatītajiem kancerogēniem. Būdams ķīmiski un termiski stabils, tam piemīt bioakumulācijas īpašības, kad tas nonāk organismā un uzkrājas tajā, tas darbojas pastāvīgi un spēcīgi. Papildus tam, ka benzapirēns ir kancerogēns, tam ir arī mutagēna, embriotoksiska un hematotoksiska iedarbība.

Benzapirēna iekļūšanas ceļi organismā ir dažādi: ar pārtiku un ūdeni, caur ādu un ieelpojot. Bīstamības pakāpe ir neatkarīgi no tā, kā benzapirēns nokļuva organismā. Eksperimentos, kā arī saskaņā ar ekoloģiski nelabvēlīgu teritoriju monitoringu, benzapirēns tiek ievadīts DNS kompleksā, izraisot neatgriezeniskas mutācijas, kas pāriet nākamajās paaudzēs. Īpašas bažas rada benzapirēna bioakumulācijas fakts: mutāciju attīstības iespējamība nākamajās pēcnācēju paaudzēs bioakumulācijas dēļ daudzkārt palielinās.

VĒLATIES ATMET SMĒĶĒŠANU?

Tad pievienojies mums maratonā, lai atteiktos no cigaretēm.
Tas padarīs atmešanu daudz vieglāku.

4.1.2. Metode benzo(a)pirēna masas daļas mērīšanai pārtikas izejvielās, pārtikas produktos un augsnē ar augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfiju

Mērķis un darbības joma

Metode paredzēta benzo(a)pirēna (BP) kvantitatīvai noteikšanai pārtikas izejvielās, pārtikas produktos un augsnē tā masas daļā, kas norādīta tabulā. 1. Mērījumu diapazona apakšējā robeža atbilst 1/2 no pieļaujamā toksīna līmeņa (satura) produktos un izejvielās, augšējā robeža - piecas reizes lielākai par pieļaujamo līmeni.

Benz (a) pirēns ir ļoti toksisks kancerogēns savienojums, un tā pieļaujamo saturu pārtikas produktos un pārtikas izejvielās nosaka Sanitārie noteikumi un SanPiN 2.3.2.560-96.

Šo paņēmienu var izmantot Krievijas Federācijas Valsts sanitārās un epidemioloģiskās uzraudzības institūcijas, citu organizāciju laboratorijas un uzņēmumi, kas saistīti ar pārtikas produktu izpēti, ķīmisko analīzi un sertifikāciju. Metodoloģija nav arbitrāža.

Rīsi. 11.14.

• 1. Naftalīns 9. Chryzen (0,17*)
• 2. Acenaftēns (1,40*) 10. Benz(a)pirēns
• 3. Fluorēns (2,60*) 11. Benz(b)fluorantēns (0,26*)
• 4. Fenantrēns *2,40*) 12. Benz(c)fluorantēns (0,10*)
• 5. Antracēns (0,13*) 13. Benz(a)pirēns (0,2*)
• 6. Fluorantēns (0,74*) 14. Dibenz(a,b)antracēns
• 7. Pirēns (0,67*) 15. BeH3(g, h, i)nephen (0,21*)
• 8. Benz(a)antracēns (0,07*) 16. Indeno(1,2,3-cc1)pirēns (0,26*)

Analīzes nosacījumi:

Kolonna: Supelcosil® LC RAS ​​(250 mm x 2,1 mm; 5 µm);

Gradients: acetonitrils (A) 50-100%, ūdens (B) 50-0%; 200 µl/min Temperatūra: 25°C Parauga tilpums: 10 µl Noteikšana: Gripas, saskaņā ar programmu

Mērījumu kļūdas raksturojums

BP masas daļas mērījumu rezultāta relatīvās kļūdas (±5) robežas (ar ticamības līmeni 0,95) norādītas tabulā. viens.

1. tabula. Analizētie objekti, mērījumu diapazoni un raksturlielumi

Produktu grupa (analizētais objekts)	Atļautais saturs ( IV X), mg/kg	BP masas daļas mērījumu diapazons, mg/kg	Koeficients ekstrakcija,	Relatīvās kļūdu robežas (±8), %
Kūpināta gaļa, zivis un tauku produkti

Mērinstrumenti, palīgierīces, materiāli un reaģenti

Mērinstrumenti

Šķidruma hromatogrāfi:

• - Mikrokolonna "Milichrome-5", TU 25-7405.0009-89, 3. versija ar fluorimetrisko (FlD) detektoru (1. iespēja).
• - Izokrātiskais vai gradienta šķidruma hromatogrāfs, piemēram, "Kpayeg" (Vācija), Krievijas Federācijas valsts mērinstrumentu reģistrs 16848-97 vai hromatogrāfiskais pielikums "VEZHKh-3", LLP "Lumex" (Sanktpēterburga), aprīkots ar FLD "Fluorat-02 -2M", LLP "Lumex", Krievijas Federācijas valsts mērinstrumentu reģistrs 14093-99 (2. iespēja).
• - Izokrātiskais vai gradienta šķidruma hromatogrāfs ar jebkura veida PLD, piemēram, "Kpaerg" (Vācija), Krievijas Federācijas valsts mērinstrumentu reģistrs 16848-97 (3. iespēja).

Hromatogrāfiskās kolonnas "Diasfer-110-S 16", TU 4215-001-05451931-94, CJSC "BioKhimMak ST" (Maskava), ar standarta izmēriem, kas atbilst hromatogrāfijas sistēmas variantam:

• - 2 x 80 mm, dp = 5 - 7 µm (1. iespēja)
• - 2 x 150 mm, dp = 5–7 µm (2. iespēja)
• - 4 x 150 mm, dp = 5 - 7 µm (3. iespēja)

Aparatūras un programmatūras komplekss "MultiChrom-Spectrum", TU AZHRC

3.036.001, CJSC Ampersend (Maskava), vai jebkura cita programmatūra, kas ļauj veikt kalibrēšanu un kvantitatīvu noteikšanu ar ārējā standarta metodi.

GSO 7515-98 benzo(a)pirēna šķīduma acetonitrilā ar benzo(a)pirēna masas koncentrāciju 100 μg/cm 3 sastāvu, AOZT "Ekros" (Sanktpēterburga).

GSO 7064-93 sastāvs benzo(a)pirēna šķīdumam heksānā ar benzo(a)pirēna masas koncentrāciju 100 µg/cm 3, AOZT "Ekros" (Sanktpēterburga).

Svari laboratorijas elektroniski 4 šūnas. precizitātes modelis VLE 134, GOST 24104-88 vai citi.

100 µl mikrošļirces no Hamilton, modelis Microliter #1710 vai līdzvērtīgs.

Mikropipetes 0,5; 0,2; 0,1 µl; GOST 20292-74.

Izmēru cilindri 2-25,2-50, 2-100 un 2-500, GOST 1770-74.

Mērkolbas 2-10-2, 2-100-2, GOST 1770-74.

Graduētas pipetes 1, 2, 5, 10 cm 3, GOST 29227-91.

Reaģenti un materiāli

Acetonitrils šķidruma hromatogrāfijai, OP-3 augstas tīrības pakāpe, TU 6-09-14-2167-84, rektificēts.

Divreiz destilēts ūdens, TU 6-09-2502-77.

Heksāns, ķīmiski tīrs, TU 6-09-3375-78, žāvēts virs Na 2 S 04 , izlabots.

Ķīmiski tīrs benzols, GOST 5955-75, žāvēts virs Na 2 S 04 , izlabots.

Bezūdens nātrija sulfāts, ķīmiski tīrs, GOST 4166-76.

Koncentrācijas kārtridži "Diapak": A-3, P-3, C; TU 4215-002-05451931-94, ZAO BioKhimMak ST (Maskava).

Papildierīces

Sistēma eluentu filtrēšanai un degazēšanai CJSC "BioKhimMak ST" (Maskava) vai citi.

1,8 un 5,0 cm 3 stikla flakoni kalibrēšanas un analīzes šķīdumiem ar skrūvējamiem vāciņiem un teflona blīvēm no Supelco, kataloga numuri 2-6951, 2-7037 un

2-7039 vai līdzvērtīgs.

Mikromaisītājs PPE-3, "Ekros" (Sanktpēterburga).

Rotācijas iztvaicētājs IR-1M2, TU 25-1173.102-84 vai citi.

Asa dibena kolbas ar aizbāžņiem ar ietilpību 25, 10 un 5 cm 3, GOST 25336.

Ierīce šķīdumu izpūšanai slāpekļa plūsmā, kas aprīkota ar BioMark kopuzņēmuma (Ļvova) vai citu termostatiski vadāmu alumīnija bloku (sausā gaisa vannu).

Membrānas filtri ar dp = 0,4-0,5 µm.

Ierīce apmēram 7 mm Hg vakuuma radīšanai. Art. (ūdens strūklas sūknis, GOST 25336; Begemot ūdens gredzena vakuumsūknis, UVK-RK2/1, CJSC BioKhimMak ST, Maskava).

Vakuuma paraugu sagatavošanas ierīce (vakuuma kolektors) vai cita ar paraugu uztvērējiem ar ietilpību vismaz 10 cm 3 .

Bīhnera kolba, Bunsena piltuve ar ietilpību attiecīgi vismaz 500 un 200 cm 3, GOST 1770.

Dalāmā piltuve ar ietilpību 100 un 500 cm 3, GOST 25336.

Plakanas dibena koniskās kolbas ar aizbāžņiem ar ietilpību 50, 100 un 250 cm 3, GOST 25336.

Bumbierveida kolbas ar aizbāžņiem ar ietilpību 50 un 100 cm 3, GOST 25336.

Koniska piltuve ar diametru vismaz 10 cm, GOST 1770.

"zilās lentes" tipa filtrpapīrs.

Vate medicīniskā nesterila, kokvilna.

Mērīšanas metode

Tehnika ietver šādas galvenās procedūras:

• - primārā ekstrakcija ar heksānu un atkārtota ekstrakcija acetonitrilā BP no kūpināta produkta parauga;
• - primārā BP ekstrakcija ar acetonitrila-ūdens maisījumu no graudu vai augsnes parauga;
• - primārā ekstrakta koncentrēšana un attīrīšana ar cietās fāzes ekstrakciju;
• - sagatavotā parauga ekstrakta atšķaidīšana ar acetonitrila-ūdens maisījumu;
• - hromatogrāfa kalibrēšana pēc šķīdumiem ar zināmu BP masas koncentrācijas vērtību;
• - sagatavotā parauga ekstrakta šķīduma analīze ar augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfiju (HPLC) ar fluorescences signāla reģistrāciju;
• - noteiktā BP identifikācija pēc saglabāšanas parametriem;
• - BP masas koncentrācijas aprēķins, pamatojoties uz reģistrēto analītisko signālu un kalibrēšanas raksturlielumiem;
• - BP masas daļas aprēķins, pamatojoties uz BP masas koncentrāciju, pārtikas parauga masu un sagatavotā ekstrakta šķīduma tilpumu.

Drošības prasības

Strādājot ar izmantotajiem ķīmiskajiem savienojumiem, ir jāievēro drošības prasības, kas noteiktas darbam ar toksiskām, kodīgām un viegli uzliesmojošām vielām, GOST 12.1.018-86 un GOST 12.1.004-76, ugunsdrošības prasības, GOST 12.1.004- 76.

Ja BP šķīdumi nokļūst uz ādas" vai priekšmetu virsmām, tie jāapstrādā ar ūdeni un mazgāšanas līdzekli, un pēc tam ar etilspirtu. Šķīdumi jāuzglabā ledusskapī noslēgtā iepakojumā.

Darbinot sistēmu HPLC un veicot atbilstošos mērījumus, ir jāievēro elektriskās drošības noteikumi, GOST

12.1.019-79 un ierīces lietošanas instrukciju.

Operatora kvalifikācijas prasības

Personas, kurām atļauts strādāt:

• - ieguvis ķīmijas inženiera vai ķīmijas tehniķa kvalifikāciju;
• - pieredze darbā ķīmiskajā laboratorijā;
• - kuri ir pabeiguši attiecīgus apmācības kursus un stažējušies laboratorijās, kas akreditētas analīžu veikšanai, izmantojot HPLC;
• - kontroles operāciju veikšanas laikā saņemti pozitīvi rezultāti.

Mērīšanas nosacījumi

Paraugu sagatavošana, šķīdumu sagatavošana, mērījumu sagatavošana un veikšana tiek veikta apkārtējās vides temperatūrā 18-25 ° C, atmosfēras spiedienā 84,0-100,7 kPa (630-800 mm Hg), gaisa mitrumā ne vairāk kā 80% ( 25 °C temperatūrā).

Veicot mērījumus laboratorijā, jāievēro šādi nosacījumi: tīkla spriegums 220 ± 10 V, tīkla frekvence 50zh 1 Hz. Mērījumi tiek veikti apstākļos, kas ieteikti ierīces aprakstā un lietošanas instrukcijā.

Gatavošanās mērījumu veikšanai

Stikla trauki

Pirms turpmākās lietošanas izlietotos stikla traukus noskalo ar pēdējo no izmantotajiem šķīdinātājiem un rūpīgi nomazgā ar karstu ūdeni ar jebkuru veļas pulveri, pēc kārtas noskalo ar destilētu un bidestilētu ūdeni un žāvē. Tīrus traukus uzglabā, aizverot ar korķa vai vates tamponu.

Paraugu ņemšana, uzglabāšana un apstrāde

Paraugu ņemšana un vidējā noteikšana tiek veikta saskaņā ar katra produkta veida normatīvajiem dokumentiem (GOST 13586.3-83, GOST 27668-88, GOST 9792-73, GOST 7631-85). Noteikto BP ekstrahē no kūpinātu produktu paraugiem, ekstrahējot ar sausu heksānu, pēc kura iztvaicēšanas to atkārtoti ekstrahē acetonitrilā. Ekstrahējot BP no graudu vai augsnes paraugiem, izmanto ūdens-acetonitrila maisījumu (16:84). BP saturošā primārā parauga ekstrakta turpmākā koncentrēšana un attīrīšana neatkarīgi no sākotnējā produkta veida tiek veikta saskaņā ar cietās fāzes ekstrakcijas komplekso shēmu, izmantojot trīs koncentrējošās kasetnes Diapak A-3, P-3, S. .

Sagatavotos paraugus (paraugu ekstraktus) izšķīdina acetonitrila-ūdens maisījumā (70:30).

Katrs BP masas daļas mērījums ietver vismaz divu paraugu sagatavošanu un hromatogrāfisko analīzi.

Šķīdinātāju maisījumu sagatavošana

Šķīdinātāju maisījumus gatavo ar tilpuma metodi graduētajos cilindros. Nepieciešamos acetonitrila un ūdens daudzumus mēra ar atsevišķiem graduētiem cilindriem un pēc tam sajauc. Ekstraktants A: acetonitrils-ūdens (84:16).

Ekstraktantu sagatavošana

Lai pagatavotu savstarpēji piesātinātu acetonitrilu un heksānu, sadalāmajā piltuvē ar tilpumu 500 cm 3 sakratiet apmēram 300 cm 3 acetonitrila un 100 cm 3 heksāna. Pēc šķīdinātāju atdalīšanas slāņus ņem atsevišķi: apakšējo slāni (acetonitrils, kas piesātināts ar heksānu - ekstrahants B) un augšējo slāni (heksānu, kas piesātināts ar acetonitrilu - ekstrakcijas līdzekli C), starpfāzi izmet.

Eluentu sagatavošana

HPLC mērījumiem acetonitrila-ūdens maisījumus sagatavo šādās attiecībās: (90:10) - eluents 90, (84:16) - eluents 84, (80:20) - eluents 80, (70:30) - eluents 70 Gatavos eluentus filtrē caur membrānfiltru un veic vakuuma vai termisko degazēšanu.

Kalibrēšanas šķīdumu sagatavošana

BP šķīduma acetonitrilā (skatīt iepriekš) sastāva GSO pirms lietošanas atšķaida ar acetonitrila-ūdens maisījumu (7:3). Paņemta pipete

1,0 cm 3 izejas šķīduma ievieto mērkolbā ar ietilpību 100 cm 3 un šķīdinātāju pievieno līdz atzīmei. Pēc tam ar pipeti ņem noteiktus iegūtā šķīduma tilpumus, ievieto mērkolbā ar ietilpību 10 cm 3 un pievieno šķīdinātāju līdz atzīmei. Attiecīgie atšķaidīšanai izmantoto šķīdumu tilpumi un kalibrēšanas šķīdumu 2-5 (1. iespēja) un 3-7 (2., 3. variants) koncentrācijas ir parādīti tabulā. 2. Izmantojot BP šķīduma heksānā sastāva GSO (skatīt zemāk), pēc šķīdinātāja iztvaicēšanas tālāk norādītajos apstākļos, sauso atlikumu atkārtoti izšķīdina acetonitrilā un atšķaida, kā aprakstīts iepriekš, ņemot vērā sertificēta vērtību. GSO koncentrācija.

2. tabula.Šķīdumi kalibrēšanai benzopirēna (BP) analīzē

BP masas koncentrācija (sertificēta GSO vērtība), mcg/cm3	Sākotnējais atšķaidīšanas šķīdums		kalibrēšana
				BP masas koncentrācija, µg/cm3

*Neizmanto tiešai hromatogrāfijas sistēmas kalibrēšanai.

Hromatogrāfiskās sistēmas sagatavošana

Hromatogrāfs ir ieslēgts un sagatavots darbam saskaņā ar tā aprakstu un lietošanas instrukciju. Uzstādiet kolonnu "Diasfer-110-C 16" ar standarta izmēriem saskaņā ar hromatogrāfa opciju (skatīt iepriekš). Eluents ar lielāko acetonitrila koncentrāciju tiek sūknēts caur hromatogrāfisko sistēmu, līdz detektora bāzes līnija ir stabilizēta, un pēc tam to kondicionē sākotnējos gradienta apstākļos saskaņā ar attiecīgajām sadaļām "Analīzes nosacījumi".

Koncentrācijas kārtridžu sagatavošana

Koncentrējošās kasetnes Diapak A-3 un P-3 ir sagatavotas darbam šādi:

• 1. 3 cm3 sausa Diapak A vai P sorbenta ielej 10 cm 3 polipropilēna korpusā ar maināmu filtru apakšējā daļā. Korpusa augšējā tukšā daļa tiek izmantota kā piltuve parauga vai eluenta uzklāšanai.
• 2. Saspiediet kasetni vertikāli piemērotā vakuuma ierīcē un piesitiet, lai izveidotu plakanu, horizontālu sorbenta virsējo slāni. Diapak A-3 kārtridža galīgajai sagatavošanai pietiek ar sorbenta slāņa nostiprināšanu ar nelielu vates tamponu.
• 3. Lai sagatavotu Diapak P-3 kārtridžu, sorbentu secīgi mazgā ar 10 cm 3 benzola, acetona un Ekstraktants A zemā vakuumā (pilināšanas ātrums ne vairāk kā 1-2 pilieni sekundē), novēršot gaisa iekļūšanu sorbentā. Pēc kasetnes iepildīšanas ar acetonu sorbentam ļauj nosēsties, ievada augšējo polimēra filtru, to sablīvē virs sorbenta augšējā slāņa un turpina mazgāšanu. Sasniedzot Ekstraktants A līmenī 2-3 cm virs filtra, mazgāšana tiek pārtraukta un kasetne ir noslēgta ar apakšējo aizbāzni un augšējo vāku (glabāšanai). Nejaušas žāvēšanas gadījumā kārtridžs tiek mazgāts Ekstraktants A. Pirms parauga uzlikšanas aizbāžņus noņem un ar vāju vakuumu ūdens-acetonitrila maisījuma atlikumus novada līdz augšējā filtra līmenim, pēc tam nekavējoties ielej testa šķīdumu. Atkārtoti lietojamās kasetnes Diapak P-3 reģenerācija tiek veikta saskaņā ar līdzīgu shēmu, izņemot augšējā filtra noņemšanu.

Koncentrācijas kārtridžs Diapak C ir sagatavots darbam šādi:

• 1. Gatavā polipropilēna kapsula ar 1 cm3 Diapak S sorbenta ir noslēgta ar aizbāžņiem. Pēc aizbāžņu noņemšanas kārtridžs tiek sagatavots darbam, ar šļirci caur to izlaižot 5 cm 3 heksāna ar pilienu ātrumu 1-2 pilieni sekundē.
• 2. Paraugu uzklāj ar gravitācijas spēku, izmantojot tukšu polipropilēna korpusu ar 10 cm 3 tilpumu kā piltuvi, kas cieši nostiprināts Diapak C kapsulas augšējā veidgabalā.

Parauga sagatavošana mērījumiem

Benzo(a)pirēna ekstrakcija ar heksānu no kūpināta produkta parauga 10,0 g kūpināta produkta parauga paraugu samaļ javā ar 30 g bezūdens nātrija sulfāta. Maisījumu kvantitatīvi pārnes uz 100 cm 3 plakandibena kolbu un vismaz 30 minūtes maisot ekstrahē ar 40 cm 3 heksāna. Parauga kopējo tauku primāro heksāna ekstraktu dekantē un laiž cauri 10 g bezūdens nātrija sulfāta noņemšanas kolbā. Ekstrakcijas procedūru atkārto divas reizes ar diviem tilpumiem 20 cm 3 heksāna un izlaiž daļu ekstrakta caur desikantu tajā pašā destilācijas kolbā. Iztvaicē heksānu rotācijas iztvaicētājā temperatūrā, kas nepārsniedz 35 ° C, līdz smarža pazūd.

Kopējo tauku ekstraktu izšķīdina 20 cm 3 Ekstraktants B, kvantitatīvi pārnes graduētajā cilindrā ar tilpumu 50 cm 3 un šķīduma tilpumu palielina līdz 40,0 cm 3 ar to pašu šķīdinātāju.

20,0 cm 3 iegūtā šķīduma pārnes dalāmajā piltuvē ar tilpumu 100 cm 3 un BP atkārtoti ekstrahē acetonitrilā ar trīs tilpumiem 20 cm 3 Ekstraktants B. Katru reizi, panākot vispilnīgāko fāžu atdalīšanu, ņem apakšējo slāni (BP acetonitrila ekstrakts) un iztvaicē rotācijas iztvaicētājā temperatūrā, kas nepārsniedz 50 °C. °C līdz 10-15 cm 3 tilpumam. Kvantitatīvi (izmantojot acetonitrilu) pārnes šķīdumu mērcilindrā ar ietilpību 25 cm 3, tilpumu palielina līdz 21,0 cm 3 ar acetonitrilu, pievieno 4,0 cm 3 bidestilēta ūdens un kārtīgi samaisa iegūto. BP ūdens-acetonitrila ekstrakts.

benzo(a)pirēna ekstrakcija no graudu vai augsnes parauga ar acetonitrila-ūdens maisījumu

10–25 g parauga daļu pārnes plakandibena kolbā, pievieno 50–125 cm 3 Ekstraktants A, stingri ievērojot produkta parauga attiecību 1:5 attiecībā pret ekstrakcijas tilpumu, un maisa 1 stundu. filtrēts BP ūdens-acetonitrila ekstrakts caur papīra filtru uz Buhnera piltuvi vakuumā un izspiediet nogulsnes uz filtra.

Graudu vai kūpināta produkta primārā ekstrakta iepriekšēja attīrīšana un koncentrēšana

Izlaidiet cauri kasetnei Diapak A-3 25,0 cm 3 un tad 3 cm 3 Ekstraktants A ar pilienu ātrumu 2-3 pilieni sekundē uztvērējkolbā.

Savākto eluātu izlaiž caur sagatavoto Diapak P-3 kārtridžu un pēc tam 5 cm 3 acetonitrila ar pilienu ātrumu 1-2 pilieni sekundē, izvadot izskalojumus. Mērķa frakcija, kas satur BP, tiek eluēta no kārtridža ar benzola-acetonitrila maisījumu (1:1) 7 cm 3 tilpumā ar pilēšanas ātrumu 1-2 pilieni sekundē destilācijas kolbā. Eluātu iztvaicē rotācijas iztvaicētājā temperatūrā, kas nepārsniedz 50 °C, kolbā pievieno 0,5 cm 3 heksāna un rūpīgi sakrata mikromaisītājā, līdz sausais atlikums ir pilnībā izšķīdis.

Primārā augsnes ekstrakta iepriekšēja attīrīšana un koncentrēšana

Izlaidiet cauri kasetnei Diapak A-3 5,0 cm 3 BP ūdens-acetonitrila ekstrakts, tad 3 cm3 Ekstraktants A ar pilienu ātrumu 2-3 pilieni sekundē uztvērējkolbā. Pārnes eluātu uz mērcilindru ar tilpumu 25 cm 3, izskalo kolbu ar diviem tilpumiem 5 cm 3 Ekstraktants A un samaziniet šķīduma tilpumu cilindrā līdz 20 cm 3 .

Caur sagatavoto Diapak P-3 kārtridžu izlaiž 5,0 cm 3 atšķaidītā eluāta un pēc tam 5 cm 3 acetonitrila ar pilēšanas ātrumu 1-2 pilieni sekundē, izvadot izskalojumus. Mērķa frakcija, kas satur BP, tiek eluēta no kārtridža ar benzola-acetonitrila maisījumu (1:1) 7 cm 3 tilpumā ar pilēšanas ātrumu 1-2 pilieni sekundē destilācijas kolbā. Eluātu iztvaicē rotācijas iztvaicētājā temperatūrā, kas nepārsniedz 50 °C, kolbā pievieno 0,5 cm 3 heksāna un rūpīgi sakrata mikromaisītājā, līdz sausais atlikums ir pilnībā izšķīdis.

Ekstrakta smalka attīrīšana

0,5 cm 3 parauga šķīduma heksānā ar gravitācijas spēku uzklāj sagatavotajai Diapak C kārtridžai, pēc tam kolbu mazgā ar divām 0,5 cm 3 heksāna porcijām un secīgi uzliek kārtridžai, izmetot visas mazgāšanas reizes. BP eluē ar benzolu 2,0 cm 3 tilpumā ar ātrumu 1-2 pilieni sekundē noslāņošanās kolbā un iztvaicē rotācijas iztvaicētājā temperatūrā, kas nepārsniedz 50 °C. BP parauga ekstrakta sauso atlikumu izšķīdina acetonitrila-ūdens maisījumā (7:3), kura tilpumi ir norādīti sadaļās "Mērījumu nosacījumi" katram hromatogrāfijas sistēmas variantam (skatīt zemāk).

Graduācija un mērījumi

Hromatogrāfa kalibrēšana

Hromatogrāfu kalibrē, secīgi (BP mērīšanas apstākļos) ievadot kalibrēšanas šķīdumu nominālo tilpumu (2. tabula) to masas koncentrāciju augošā secībā. Katru šķīdumu injicē hromatogrāfā vismaz divas reizes. Pareizi noregulējot hromatogrāfisko sistēmu, pīķa augstumam kalibrēšanas šķīduma hromatogrammā ar viszemāko koncentrāciju vismaz 10 reizes jāpārsniedz bāzes līnijas trokšņa līmenis.

Pēc hromatogrammu matemātiskās apstrādes tiek fiksēti aiztures parametri un pīķu laukumi un izveidoti kalibrēšanas raksturlielumi (GC), kas atspoguļo pīķa laukuma vidējās vērtības atkarību no BP masas koncentrācijas kalibrēšanas šķīdumā.

Kontrolējiet kalibrēšanas raksturlielumu konstrukcijas pareizību.

Kalibrēšanas raksturlielums tiek atjaunots, mainot kolonnas, pēc apkopes un profilaktiskās apkopes veikšanas ar negatīviem GC stabilitātes uzraudzības rezultātiem (skatīt zemāk).

Benzo(a)pirēna noteikšana

Mērīšanas nosacījumi (1. iespēja)

Analīzei sagatavoto BP parauga ekstraktu izšķīdina 0,1 cm 3 acetonitrila-ūdens maisījuma.

FMD un UVPA darbības režīmi tiek iestatīti no datora tastatūras saskaņā ar lietotāja rokasgrāmatu (HSS "MultiChrome-Spectrum") un tiek kontrolēti monitoros šādā formā:

Fluorometriskais detektors

• ierosmes viļņa garums 296 nm;
• emisijas viļņa garums - gaismas filtrs Nr.2 (vairāk nekā 380 nm);
• mērīšanas laiks 0,2 s.

Automātiskais dozators

• reģenerācijas tilpums 0,4 cm 3;
• parauga tilpums 0,04 cm 3;
• plūsmas ātrums 0,15 cm 3 /min;
• vervēšanas ātrums 0,3 cm 3 /min;
• BP aiztures laiks 11 min.
• eluentu sastāvs traukos un acetonitrila gradienta sastādīšanas shēma ir parādīti tabulā. 3.

3. tabula eluenti

Mērīšanas nosacījumi (2. iespēja)

Analīzei sagatavoto (skatīt iepriekš) BP parauga ekstraktu izšķīdina 0,5 cm 3 acetonitrila-ūdens maisījuma.

• filtrs uz ierosmes līnijas - "X4";
• filtrs uz emisijas līnijas - "KhZ";
• parauga tilpums 0,02 cm 3;
• jutība ir vidēja;
• izlīdzināšana - 4;
• “fona” līmeni izvēlas, pamatojoties uz kalibrēšanas šķīduma Nr.3 testa hromatogrammas reģistrācijas rezultātiem.

• plūsmas ātrums 0,2 cm 3 /min;
• eluents 84;
• BP aiztures laiks ir aptuveni 12 minūtes.

Gradienta sadalīšanas režīms:

• plūsmas ātrums 0,25 cm 3 /min;
• eluents 100 eluentā 70 20 minūtēs;

Mērīšanas nosacījumi (3. iespēja)

Analīzei sagatavoto BP parauga ekstraktu izšķīdina 0,5 cm 3 acetonitrila-ūdens maisījuma.

• ierosmes viļņa garums 375 nm;
• emisijas viļņa garums 405 nm;
• plūsmas ātrums 0,8 cm 3 /min;
• parauga tilpums 0,02 cm 3;
• laika konstante 1,0 s.

Izokrātiskais atdalīšanas režīms:

• eluents 84;
• BP aiztures laiks ir aptuveni 12 min;

Gradienta sadalīšanas režīms:

• lineārais gradients no 30 līdz 70% eluents 100 eluentā 70 20 minūtēs;
• BP aiztures laiks ir aptuveni 14 minūtes.

Hromatogrammu iegūšana un apstrāde

Parauga ekstrakta šķīdumu divreiz ievada hromatogrāfā. BP identifikāciju veic, pamatojoties uz pīķa aiztures parametru salīdzinājumu parauga ekstrakta un kalibrēšanas šķīdumu hromatogrammās. Aptuvenie saglabāšanas parametri ir norādīti sadaļās "Mērījumu nosacījumi". Noteiktā savienojuma ticama identifikācija atbilst starpībai starp aiztures parametru vērtībām kalibrēšanas šķīdumam un paraugam, kas nepārsniedz 0,2 min.

Ekstrakta šķīduma atšķaidīšana

Veic gadījumā, ja noteiktā BP masas koncentrācija pārsniedz tā lielāko masas koncentrāciju kalibrēšanas šķīdumos. Ekstrakta šķīdumu atšķaida divas reizes (atšķaidīšanas attiecība, atšķaidīšana = 2), ņemot vienādos tilpumos šo šķīdumu un acetonitrila-ūdens maisījumu (70:30) un sajaucot pēdējo. Gadījumā, ja viens atšķaidījums nenovērš "no skalas", procedūru atkārto (atšķaidījuma pakāpe, dil = 4).

Mērījumu rezultātu apstrāde

Aprēķina pīķa laukuma vidējo vērtību (hromatogrāfa izejas signāls) divām parauga ekstrakta šķīduma injekcijām hromatogrāfā. Kontrolējiet izejas signālu konverģenci (skatīt zemāk).

Atbilstoši kalibrēšanas atkarībai tiek atrasta BP masas koncentrācijas vērtība šķīdumā, kas atbilst pīķa laukuma vidējai vērtībai.

BP masas daļu (I^), mg/kg, i-tajā paraugā (noteikšanas rezultāts) aprēķina pēc formulas

kur Cbp ir analizējamās vielas masas koncentrācija BP i-tā parauga ekstrakta šķīdumā, μg/cm 3 (aprēķināts pēc kalibrēšanas atkarības, pamatojoties uz pīķa laukuma vidējo vērtību); Vp- BP /-tā parauga ekstrakta šķīduma tilpums, cm 3; R- BP ekstrakcijas pakāpe parauga sagatavošanas stadijā saskaņā ar tabulu. 2; M ekv- attīrīšanai un tai sekojošai hromatogrāfiskai noteikšanai izmantotā BP ūdens-acetonitrila ekstrakta proporcijai atbilstošās parauga daļas masa - parauga ekvivalentā masa, kas ir 5,0 g (graudi, kūpinājumi) vai 0,25 g (augsne).

Ekstrakta atšķaidīšanas gadījumā (skatīt iepriekš) BP masas daļa ( W,-, mg/kg) /-th dimensijā aprēķina pēc formulas

kur wj- vērtība, kas iegūta pēc formulas (II. 1), dil - atšķaidījuma pakāpe (skatīt iepriekš).

Aprēķiniet BP masas daļas vidējo vērtību diviem paraugiem (analīzes rezultāts):

Kontrolējiet BP masas daļas noteikšanas rezultātu konverģenci (skatīt zemāk).

Mērījumu rezultātu reģistrācija

BP masas daļas analīzes (mērīšanas) rezultāts nosakāmajā objektā tiek parādīts formā

kur W- BP masas daļa, ko aprēķina pēc formulas (II.3).

Ja BP netiek atklāts, mērījumu rezultāts tiek parādīts formā

kur P "ds ir pieļaujamais BP saturs saskaņā ar 1. tabulu.

MVI kļūdu kontrole

Hromatogrāfa izejas signālu konverģences kontrole

Kontrole tiek veikta katra parauga kalibrēšanas un analīzes laikā attiecībā pret izejas signāliem (BP pīķu laukumu vērtības hromatogrammās), kas iegūti ar divām šķīduma injekcijām hromatogrāfā. Kontroles rezultāts tiek uzskatīts par apmierinošu, ja izejas signālu diapazons, atsaucoties uz vidējo aritmētisko, nepārsniedz 8%.

Kalibrēšanas raksturlīknes konstrukcijas pareizības kontrole

Kontrole tiek veikta katrā kalibrēšanas reizē. Kontroles rezultāts tiek atzīts par apmierinošu, ja ir izpildīti nosacījumi katram kalibrēšanas šķīdumam

kur sj- BP pīķa laukuma vidējā vērtība y "kalibrēšanas šķīdumam, c.u.; S)- pīķa laukuma vērtība, kas atbilst kalibrēšanas raksturlielumam BP masas koncentrācijai y "-tajā kalibrēšanas šķīdumā, c.u.

Kalibrēšanas raksturlieluma stabilitātes kontrole

Kontrole tiek veikta katru dienu pirms darba uzsākšanas ar analizētajiem paraugiem, izmantojot kontrolšķīdumu, kas tiek izmantots kā kalibrēšanas šķīdums ar BP masas koncentrāciju, kas atbilst tā pieļaujamajam saturam analizējamajā objektā.

Kontroles rezultāts tiek atzīts par apmierinošu, ja nosacījums ir izpildīts

kur C ki - BP masas koncentrācijas vērtība kontroles šķīdumā, kas noteikta ar kalibrēšanas raksturlielumu pīķa laukuma vidējai vērtībai, µg/cm 3 ; Ar to - BP masas koncentrācijas vērtība kontroles šķīdumā saskaņā ar tabulu. 2.

Noteikšanas rezultātu konverģences kontrole

Kontrole tiek veikta katrā analīzē (mērījumā). Kontroles rezultāts tiek uzskatīts par apmierinošu, ja noteikšanu rezultātu diapazons, kas attiecas uz vidējo aritmētisko (analīzes rezultātu), nepārsniedz 10%.

Kļūdu kontrole ar aditīvu metodi

Kontrole tiek veikta:

• a) pirms šī MVI piemērošanas sākuma - bez kļūmēm;
• b) ja parādās apšaubāmi BP masas daļas noteikšanas rezultāti;
• c) saskaņā ar iekšējās laboratorijas kontroles plāniem;
• d) pēc to organizāciju pieprasījuma, kuras kontrolē laboratorijas darbību.

Piedeva tiek veidota, pamatojoties uz kalibrēšanas šķīdumu. Papildu vērtība (D, mg/kg) ir izvēlēts tā, lai BP masas daļa paraugā palielinātos 1,5-2,5 reizes. Aprēķins tiek veikts pēc formulas

kur C D- BP masas koncentrācija kalibrēšanas šķīdumā, µg/cm 3 ; Vo- paraugā ievadītā BP kalibrēšanas šķīduma tilpums, cm3; M fw- analīzei ņemtā parauga ekvivalents svars, g.

Piedevu ievada graudu vai augsnes parauga primārajā ekstraktā kalibrēšanas šķīduma veidā, kas sagatavots saskaņā ar tabulu. 2. Piedevu ievada kūpinātā produkta primārajā ekstraktā līdzīgas koncentrācijas šķīduma veidā heksānā. Lai to izdarītu, BP sastāva GRM heksānā (skatīt iepriekš) tiek atšķaidīts (ņemot vērā sertificētās koncentrācijas vērtības korekciju) saskaņā ar kalibrēšanas šķīdumu sagatavošanas procedūru (skatīt iepriekš), izmantojot heksānu kā šķīdinātāju un vajadzīgās koncentrācijas šķīduma iegūšana. Izmantojot BP GSO sastāvu acetonitrilā pēc šķīdinātāja iztvaicēšanas, sauso atlikumu atkārtoti izšķīdina heksānā un atšķaida ar heksānu, kā aprakstīts iepriekš.

Divu paraugu ar dabīgo BP saturu un divu paraugu ar BP pievienošanu analīze tiek veikta tādos pašos apstākļos (viens instruments, viens kalibrēšanas raksturlielums, viens operators). Kontroles rezultāts tiek atzīts par apmierinošu, ja nosacījums ir izpildīts

kur W D- BP masas daļa paraugos ar piedevu, mg/kg; W- BP masas daļa paraugos bez piedevām, mg/kg ( W D un W- vidējās masas daļas vērtības diviem paraugiem ar pozitīviem konverģences kontroles rezultātiem).

Šīs metodes pielietojuma ilustrācija praktiskajā ekonalītikā var kalpot kā hromatogramma un kalibrēšanas grafiks benzo(a)pirēna noteikšanai pārtikas produktos (11.15. un 11.16. attēls).

Kļūdas kontroles rezultāti benzo(a)pirēna noteikšanā objektos ar piedevu metodi ar fluorimetrisko detektēšanu 375 Ex/405 Et (3. variants).

Piedevas līmenis atbilst 0,5 no pieļaujamā benzapirēna satura (0,0005 mg/kg - graudi un kūpinājumi, 0,01 mg/kg - augsne).

Rīsi. 11.15.

Graduācija komponentam: BaP Korelācijas koeficients: 0,999667 Atbilde: Platība

Atsauces kanāls 365 Ex/405 Em

Formula Y = Ki X

Vērtības 100 ( W D - R-D)/D ir attiecīgi 10 un 16% 1. un 2. paraugam. Noteiktais savienojums sākotnējā kviešu miltu paraugā ir 0,00009 kg/kg.

1. paraugs — 0,00064 mg/kg 2. paraugs — 0,00067 mg/kg

• Vispārīgā gadījumā kalibrēšanas raksturlielumam ir forma S = AC + B, kur S ir pīķa laukums, c.u.; C ir piesārņojošās vielas masas koncentrācija, µg/cm3; A un B ir koeficienti.